JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 3:28 דק' • April 30th, 2023
- התחילו בשיכון משותף של מספר קבוע של זבובי פירות Drosophila melanogaster זכרים ונקבות בבקבוקון המכיל מדיום קמח תירס. זה מאפשר צפיפות עקבית של צאצאים.
אפשרו לנקבות הזבובים להטיל ביצים. לאחר מכן הסר את הזבובים הבוגרים. הביצים יהפכו לזחלים, לגלמים ולבסוף לזבובים בוגרים בטווח של 10 ימים. זבובים חדשים שצצים מוקדם יותר מהקבוצה שלהם צריכים להיות מוסרים לפני יום 9. חלקו את הזבובים המסונכרנים כעת לקבוצות עבור תנאי הבקרה והניסוי. שיכון משותף של זבובים זכרים ונקבות מאפשר הזדווגות, תוך הסרת משתנה המשפיע על תוחלת החיים.
לאחר מספר ימים, הפרידו את הזבובים לפי מין לקבוצות. מקם מספר שווה של זבובים בתנאי הניסוי המתאים. כל שלושה ימים, מעבירים את הזבובים החיים לבקבוקון חדש ורושמים את מספר הזבובים המתים. חזור על תהליך זה עד שכל הזבובים מתו.
לאחר לפחות שלושה ניסויים משוכפלים, שרטט את האחוז הממוצע של זבובים ששרדו ביום כדי ליצור עקומות הישרדות ממוצעות עבור כל מצב. בדוגמה זו נראה כיצד ליצור עקומות הישרדות עבור קבוצות שטופלו בכימיקלים משבשי אנדוקרינית.
- בפרוטוקול תוחלת החיים, תחילה הציבו 20 בקבוקונים עם שמונה נקבות וארבעה זכרים, שכל אחד מהם מלא ב-10 מיליליטר של מזון מקמח תירס, ואכסנו אותם בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס. לאחר ארבעה ימים, השליכו את הזבובים והחזירו את הבקבוקונים לאינקובטור. בשעות אחר הצהריים המאוחרות של יום 9, הוציאו את כל הזבובים החדשים מהבקבוקונים והחזירו את הבקבוקונים לאינקובטור.
לאחר 16 עד 24 שעות, חלקו 250 זבובים בוגרים בני יום אחד משני המינים לארבע קבוצות תחת הרדמה קלה של פחמן דו חמצני והעבירו אותם לבקבוקי 250 מיליליטר המכילים מזון בינוני למבוגרים, שלושה בתוספת ריכוזי EDC שונים, ואחד עם ממס EE2 בלבד. שמרו על הזבובים בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס במשך יומיים-שלושה כדי לאפשר להם להזדווג. לאחר מכן מיין כל קבוצה של זבובים לפי מין לשתי קבוצות. בתוך כל תנאי טיפול לשני המינים, חלקו באופן אקראי כל קבוצה לחמישה בקבוקונים מקבילים בצפיפות של 20 פרטים לכל בקבוקון. הכינו גיליון אלקטרוני של תוחלת חיים שבו מספר הזבובים המתים מופחת ממספר הזבובים ששרדו מההעברה הקודמת, כך שמספר הניצולים בכל העברה יתקבל באופן אוטומטי.
לאחר שלושה ימים, להעביר את הזבובים ללא הרדמה בקבוקונים חדשים המכילים את המזון המתאים באותו זמן ולבדוק מוות. רשום את גיל הזבובים ואת מספר הזבובים המתים. חזור על ההעברה כל שלושה ימים עד שכל הזבובים ימותו.