הרכבת מוחות דרוזופילה בוגרים: שיטה להכנת שקופיות לדימות קונפוקלי

- במגלשת מיקרוסקופ טעונה חיובית, הדביקו שני פתקי כיסוי עם מרחק מספיק ביניהם כדי ליצור מקום להרכבת מוחות הדרוזופילה. מתחת למיקרוסקופ הסטריאופוני, מזרימים את המוחות בתווך ההרכבה לתוך החלל הזה. המטען השלילי של הרקמה יעזור למוח לדבוק במטען החיובי על פני השטח של המגלשה.

הסר את אמצעי ההרכבה העודפים כדי לאפשר מיקום מדויק של המוחות במגלשה בתבנית רשת כאשר אונות האנטנה פונות כלפי מעלה, ולאחר מכן גשר על שתי החלקות הכיסוי על ידי הדבקת כיסוי שלישי לרוחב כדי לכסות את המוח.

כדי למלא את החלל, הניחו את המדיום המרכיב טיפה אחר טיפה לתוך קצה החלל, ואפשרו לו להתפשט בתנועה נימית כך שלא יפריע למוח.

אטמו את החלל עם לק, ואחסנו בטמפרטורה שלילית של 20 מעלות צלזיוס בחושך כדי לשמר את הפלואורסצנטיות של רקמות מוכתמות.

בפרוטוקול לדוגמה, נרכיב מוחות דרוזופילה לצורך הדמיה קונפוקלית של נוירונים מוכתמים במערכת החיסון.

- כדי להרכיב את המוח, לבנות מגלשת גשר. מקם שני כיסויי בסיס במרחק של כסנטימטר אחד זה מזה במגלשה טעונה חיובית. ודא כי הצד הטעון חיובי הוא עם הפנים כלפי מעלה. לאחר מכן הדביקו את החלקות הכיסוי למגלשה עם לק לציפורניים, והניחו ללק להתייבש לחלוטין לפני שתמשיכו.

לאחר מכן, הניחו את המגלשה מתחת למיקרוסקופ סטריאו ומוחות פיפטה במדיום לתוך החלל שבין פתקי הכיסוי. הקפד להתאים את התאורה כדי לשפר את ההדמיה של המוח.

לאחר מכן, שאפו את אמצעי ההרכבה הנוספים מהשקופית, תוך זהירות להימנע מהמוח. לאחר מכן, פתילו את עודפי המדיה המצטברים. זה יאפשר למוח להיות ממוקם בצורה מדויקת יותר. כעת, באמצעות מלקחיים, כוונו את המוחות לתבנית רשת כשאונות האנטנה שלהם פונות כלפי מעלה.

לאחר מכן, הניחו את החלקת הכיסוי על המוח, והשתמשו בלק לציפורניים כדי לאטום את הקצוות של חלקת הכיסוי העליונה המחוברים להחלקות כיסוי הבסיס.

כעת, יש להעמיס את החלל המרכזי באמצעי הרכבה טריים כלפי מטה, ולאפשר למדיה להיגרר מתחת לחלקת הכיסוי על ידי פעולה נימית. כאשר החלל מלא, אטמו אותו לחלוטין באמצעות לק שקוף.