דרוזופילה כימות צומת נוירומוסקולרי (NMJ): שיטה להערכת מורפולוגיה ותפקוד סינפטיים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 5:08 דק׳ • April 30th, 2023
- ראשית, זחלי דרוזופילה אימונוסטיים עם סמנים המדגישים היבטים שונים של NMJs או צמתים עצביים-שריריים. זהו האזור שבו סופו של אקסון נוירון מוטורי בא במגע עם שריר, והמורפולוגיה שלו משמשת כקריאה של תפקוד סינפטי.
האקסון מסתיים במספר ענפים היוצרים בליטות הנקראות בוטונים. מוליכים עצביים משתחררים מהבוטונים וגורמים להתכווצות שרירים. אזורים של שחרור נוירוטרנסמיטר נקראים אזורים פעילים. כאן סמן אחד הוא ספציפי עבור חלבון סינפטי המתאר את NMJ, והסמן השני הוא עבור חלבון הנמצא באזורים פעילים.
לאחר מכן, רכשו תמונות NMJ באמצעות מיקרוסקופיה והעריכו כמותית את המורפולוגיה שלהן באמצעות תוכנת ניתוח תמונות חצי אוטומטית. החילו סדרה מוגדרת מראש של פקודות תוכנה על התמונות. קובצי הפלט מכילים תמונות NMJ מנותחות ותוצאות מורפולוגיה. התכונות שניתן למדוד כוללות מספר ושטח פנים של בוטונים, אורך NMJ ומספר ענף, מספר תאי NMJ לא מחוברים ומספר האזורים הפעילים.
בדוגמה הבאה ננתח את המורפולוגיה של NMJ דרוזופילה המוכתמת ב-DLG1, סמן פוסט-סינפטי, וב-BRP, סמן אזור פעיל.
- עבור פרוטוקול זה, צור ערימות תמונות של NMJs ושמור אותם כקבצי TIFF בודדים כאשר ערוץ 1 מציג צביעת DLG1 או סמן דומה וערוץ 2 מציג צביעת BRP. כדי להתחיל, צור הקרנות Z וערימות יתר של קובצי התמונה של NMJ. פתח את אפשרויות התוסף ובחר Drosophila NMJ morphometrics.
כעת, זהה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים