פגיעה עצבית הנגרמת על ידי לייזר בשני פוטונים: שיטה לצפייה בניוון והתחדשות אקסונים בזחלי דרוזופילה

- התחילו בהרכבת זחל נקי ומורדם מתחת לכיסוי זכוכית כשראשו מורם. לאחר מכן, חשוף את אזור העניין על ידי דחיפה עדינה של תלוש הכיסוי כדי לגלגל את הזחל ולהתאים את מיקומו. השתמש בהדמיה קונפוקלית כדי לאתר את התאים העצביים של הזחל. זהה אקסון ספציפי על אחד מתאי עצבי המטרה כאתר לפציעה.

לאחר מכן חשוף את אקסון המטרה ללייזר בעל שני פוטונים בעוצמה גבוהה יותר מזו המשמשת להדמיה כדי לגרום נזק. לייזר דו-פוטוני משמש בשל יכולתו לחדור ולמקם במדויק נזק בתוך רקמה חיה עם נזק מינימלי לרקמה הסובבת אותו.

עצור את החשיפה ללייזר מיד כאשר יש נזק לנוירון המטרה, וכתוצאה מכך אקסוטומיה, או ניתוק של האקסון. לבסוף, דמיינו את תא העצב הפגוע כדי לראות את הניוון שלו ואת ההתחדשות שלאחר מכן בנקודות הזמן הרצויות.

בפרוטוקול לדוגמה, נרכיב זחל למיקרוסקופיה, נגרום נזק לנוירונים תחושתיים של הזחל, ונעקוב אחר התחדשות עצבית.

- התחילו בהרדמת הזחלים. בתוך מכסה אדים, מניחים צלחת זכוכית 60 מ"מ לתוך צלחת פטרי פלסטיק 15 ס"מ. לאחר מכן קפלו פיסת נייר טישו והניחו אותה בצלחת הזכוכית. מניחים את צלחת אגר ענבים על הרקמה לאחר הוספת אתר diethyl.

לאחר מכן, על מגלשת זכוכית מניחים טיפה אחת של שמן Halocarbon 27 במרכז, ומניחים נקודה של שומן ואקום על כל אחת מארבע הפינות. לאחר מכן השתמשו במלקחיים כדי להעביר זחל אחד לצלחת האגר וכסו את צלחת הזכוכית כדי להרדי