מיקרו-הזרקה של תאי אחות דרוזופילה: שיטה להעברה תוך-תאית

- הניחו על במת המיקרוסקופ מכסה עם תאי ביצים מנותחים. איתור תא ביצית בשלב ההתפתחותי המתאים וכיוון למיקרו-הזרקה. בתאי ביציות בשלב בינוני עד מאוחר יש חלמון ביצית גדול הנראה לעין, ואלה בכיוון הנכון נמצאים עם הציר הקדמי-אחורי שלהם בניצב לכיוון ההזרקה.

תאי עצב דרוזופילה הם קבוצה של 15 תאים בתוך תא הביצית האחראים להפקדת חומרי מזון וביומולקולות שמקורם אימהי בביצית המתפתחת. הגדר את מערכת המיקרו-מזרק ללחץ ההזרקה והפיצוי המתאים כדי להבטיח נפח הזרקה עקבי וזרימה החוצה. בזהירות להביא מחט נימי טעון בעבר לשדה הראייה, כך התאים והמחט נמצאים באותו מישור מוקד.

ודא כי אין אוויר כלוא בקצה הנימים וכי יש זרימה רציפה של התמיסה. לאחר מכן התאימו את מיקום Z של המטרה להתמקד בקרום המפריד בין תאי הזקיק לתאי האחות, הכניסו את המחט לתא אחות ובצעו את ההזרקה.

הפרוטוקול הבא מדגים הזרקה זעירה של תאי אחות דרוזופילה עם בדיקות אוליגונוקלאוטיד פלואורסצנטיות, הנקראות משואות מולקולריות, כנגד תעתיקי mRNA שנתרמו על ידי האם להדמיית תאים חיים.

- עבור מיקרו-הזרקה של משואות מולקולריות, בחר את מטרת השמן 40x והרכיב תלוש כיסוי עם תא הביצים המנותחות על במת המיקרוסקופ. אתר תא ביצית בשלב ההתפתחותי האמצעי עד המאוחר המכוון כראוי למיקרו-הזרקה, ולאחר מכן הגדר מיקרו-מזרק עם לחצי ההזרקה והפיצוי המתאימים.

באמצעות הג'ויסטיק של המיקרומניפולטור, הורידו בעדינות מחט עמוסה במיקרוליטר אחד של תמיסת משואות מולקולרית לתוך טיפת השמן. הביאו את הקצה למיקוד לכיוון הפריפריה של שדה הראייה. בצע פעולה נקייה כדי להסיר את האוויר מקצה המחט ולוודא שיש זרימה מהמחט, ולהביא את המחט למצב ביתי.

התמקדו בתא הביצים להזרקה מיקרו, והחזירו את המחט למיקוד קרוב לקצה תא הביצה. בצע התאמה עדינה של מיקום Z של המטרה כך שהקרום המפריד בין תאי הזקיק לתאי האחות יהיה ממוקד. הכנס את המחט לתא אחות להזרקת המשואות המולקולריות במשך פרק זמן של שתיים עד חמש שניות.

- כדי להבטיח הצלחה במיקרו-הזרקה הניתנת לשחזור, התמקדו בזהירות בקרום המפריד בין תאי הזקיק לבין תאי האחות שיוזרקו, תוך מיקוד קצה המחט באמצעות המיקרומניפולטור.

- כאשר כל המשואות המולקולריות הוזרקו, הסר בעדינות את המחט ומשוך אותה למצב ביתי. שנו את המטרה להגדלה הרצויה לצורך רכישת תמונה, ולאחר מכן התמקדו בתא הביצים מתחת למטרה החדשה והתחילו ברכישת התמונה.