ייבוש כימי: הכנת דגימה ביולוגית לסריקת מיקרוסקופ אלקטרונים (SEM)

- כדי להתחיל, התחל על ידי התייבשות וייבוש מדגם קבוע כדי להפחית את עיוות הדגימה הנגרם על ידי הסרת גזים ומים נוזליים בלחץ ההפעלה המופחת של מיקרוסקופ אלקטרונים סורק קונבנציונאלי, SEMs.

כדי לייבש את הדגימה, לשטוף אותו עם ריכוזים הולכים וגדלים של אתנול במים עד 100% אתנול הוא הגיע. לאחר מכן חזור על תהליך זה עם חומר ייבוש כימי באתנול עד הדגימה נשטפת עם חומר ייבוש טהור. מעבירים את הדגימה וחומר הייבוש לצלחת אידוי. כסו אותו במינימום חומר ייבוש נוסף ותנו לו להתייבש במכסה אדים למשך הלילה.

לאחר מכן, הרכיבו את הדגימה המוכנה על גבי גבעולי מיקרוסקופ באמצעות סרט דבק פחמן. לבסוף, מרחו צבע כסף על שולי הספח, ולאחר מכן מקצה הספח לכל אחת מהדגימות, כדי להפחית הצטברות של אלקטרונים עודפים, מה שעלול לגרום לתוצרי תמונה לא רצויים.

בניסוי זה, זבובי פירות, Drosophila melanogaster, מוכנים לניתוח SEM באמצעות חומר המייבש HMDS.

- כדי להכין Drosophila melanogaster, לטבול זבובים מורדמים 1 מיליליטר של fixitive במשך 2 שעות ב 4 מעלות צלזיוס, לוודא שהם שקועים לחלוטין.

השתמש פיפטה זכוכית כדי להסיר את fixitive. שטפו את דגימת הדרוזופילה הקבועה בצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר שלוש פעמים עם מיליליטר אחד של חיץ פוספט מולארי 0.1 pH 7.2 בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. השתמש פיפטה זכוכית כדי להסיר כל כביסה, נזהר לא להסיר את הד