הזרקה של זבובי דרוזופילה בוגרים: שיטה של משלוח תרכובת או תווית

- הכינו מחטי הזרקה מחודדות על ידי משיכת נימי זכוכית בעלי דופן דקה באמצעות מושך מחט. החזיקו מחט מתחת למיקרוסקופ ושברו את הקצה, וודאו שהפתח גדול מספיק כדי לחדור את הקוטיקולה של הזבוב הבוגר מבלי לפצוע אותה יותר מהנדרש. מדוד את נפח ההזרקה על ידי העמסת המחט שלך עם צבע סטרילי ותמיסת חיץ מלח ולאחר מכן פליטתה על טיפת שמן מינרלי על מיקרומטר שלב. השתמש בקנה המידה על המיקרומטר כדי למדוד את הקוטר של הטיפה שנפלטה, אשר ניתן להשתמש בו כדי לחשב את נפח שניתן, ולכייל את הגדרות המזרק בהתאם.

טען את המחט בתמיסת ההזרקה שלך והרכיב אותה על פיית הזרקה. הרדימו את הזבובים שלכם עם CO2 וסדרו אותם על משטח זבוב CO2 שישמור עליהם מורדמים. ברגע שהזבובים נמצאים בכיוון הנכון לניסוי שלך, המשך עם הזריקות. בפרוטוקול לדוגמה, אנו נזריק לזבובים בוגרים חלקיקים המסומנים בפלואורסצאין עבור הדמיה in vivo.

- לאחר משיכת נימי זכוכית דקים עם מושך מחט, השתמש במיקרומטר כדי להחזיק את המחט מתחת למיקרוסקופ והשתמש בפינצטה מנירוסטה מספר חמש כדי לשבור את הקצה לקוטר קצה של 100 מיקרומטר. כדי למדוד את נפח הנוזל שיוזרם לכל זבוב, יש להעמיס מחט נימית עם צבע מאכל סטרילי 5% ב-PBS ולגרש את הנוזל על טיפת שמן מינרלי על מיקרומטר שלב 0.01 מילימטר.

מוציאים 10 מיקרוליטר של 1.6 מיליגרם למיליליטר חלקיקים על ריבוע קטן של פרפילם ומושכים את הנוזל לתוך המחט. ה