JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 4:18 דק' • April 30th, 2023
- כדי להתכונן למזין הנימים, או מבחן CAFE, הכניסו נימי זכוכית מדורגים או מסומנים מלאים במזון נוזלי צבעוני, בקצה התחתון תחילה, דרך קצות פיפטה על גבי בקבוקון ניסוי שהורכב מראש. ודא שהנימים ממוקמים היטב באותו גובה ואינם באים במגע עם המנגנון.
סמן את רמת ההתחלה של המניסקוס בכל נימים. לאחר מכן אחסנו את הבקבוקונים בסביבה מבוקרת טמפרטורה, לחות ואור למשך הניסוי תוך החלפת נימים לפי הצורך. במהלך בדיקת CAFE, זבובים ניידים אינם מרוסנים ויש להם גישה חופשית לקצה הפתוח התחתון של המיקרופיפטה. זבובים ניזונים מרצון כאשר הם מאריכים את חוטמיהם וצורכים את הנוזל, מה שמקטין את המדיום בתוך הנימים.
כדי לעקוב אחר צריכת המזון והעדפתו לפרק זמן מוגדר, רשמו את ירידת המניסקוס מסימן ההתחלה לרמה בסוף אותה תקופה מנימי הזכאות. בפרוטוקול לדוגמה, נראה את בדיקת CAFE עם ההרכבה שונה כדי להשיג אידוי מופחת מהנימים המלאים בנוזל.
- מוציאים בזהירות את קצה הפיפטה שסוגר את אחד הפתחים החיצוניים, ומכניסים תחילה נימי זכוכית מלאים, בקצה התחתון. אבטחו את הנימים על ידי הנחת קצה הפיפטה בחזרה ליד הנימים. חזור על שלב זה עבור כל פתרונות המזון שנבדקו.
לאחר מכן, מניחים את קצוות הנימים בתוך כל הבקבוקונים באותה רמה, 3 עד 4 ס"מ מהמכסה. השאירו מרחק בין נייר הסינון כדי למנוע דליפה של הנימים. השתמש בעט סמן כדי לסמן את הקצה העליון של הנוזל הצבעוני. תייגו אותם בנפרד באמצעות קוד פס כדי להבטיח שניתן יהיה לזהות את הנימים השונים.
הכניסו את מבחני CAFE מוכנים לקופסת פלסטיק עם שיבוץ מרושת. השתמשו בספוג כדי למרוח 100 מיקרוליטר מים מתוקים כל 24 שעות כדי לשמור על לחות קבועה בתוך הבדיקה. השתמשו בארבעה בקבוקונים נפרדים מלאים ב-30 מיליליטר H2O מזוקק כפול כמכשירי לחות, והניחו אותם ליד מבחני CAFE בקופסת הפלסטיק.
כסו את קופסת הפלסטיק כדי ליצור סביבה מבוקרת לחות במהלך הניסוי. העבירו את הקופסה למיקום בטוח בתא אקלים מבוקר טמפרטורה, אור ולחות למשך תקופת הניסוי. לפני כל מרווח של 24 שעות, שימו לב לזבובים המתים, והשתמשו במספר הזבובים החיים כדי לחשב את הצריכה לכל זבוב לתקופה הבאה.
בסוף הבדיקה ולפני החלפת הנימים, שמור את בדיקת CAFE במצב זקוף. אין להסיר את המכסה, ולסמן את המניסקוס התחתון של הנימים. מחק את הנתונים אם סוף הסימון אינו נמוך מהסימן הראשוני. החלף את הנימים המשומשים בנימים מלאים טריים לניסויים ארוכי טווח כל 24 שעות.
למדוד את הירידה של המניסקוס. לאחר מכן השליכו את הנימים הישנים. לאחר מכן בזהירות להסיר את נימים מן הבדיקה, ולאחסן אותם לאיסוף נתונים. בדוק אם הנוזל בתוך הנימים הגיע לקצה התחתון. אם הנוזל בתוך הנימים לא הגיע לקצה התחתון, השליכו את הנתונים.
לאחר הניסוי, פרקו את ההתקנה, ושטפו את הבקבוקונים, המכסים ובאנגי הספוג באמבט סבון. לאחר מכן יבשו אותם למשך הלילה בטמפרטורת החדר לשימוש נוסף. חזרו על ניסויים עם אותם גנוטיפים לפחות בשלושה ימים שונים. בעזרת קליפר, מודדים את המרחק בין סימן-התחלה לסוף-סימן על הנימים. לבסוף, השליכו את הנימים לאחר המדידה.