אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:16 דק׳ • April 30th, 2023
- כדי לכוון זחל לדיסקציה של פילה, מניחים אותו בכלי מצופה סיליקון המכיל מלח קר ומזהים את הצדדים הגביים והגחונים שלו. צינורות קנה הנשימה העוברים לאורכו מסמנים את הצד הגבי, ואילו חגורות הבטן מזהות את הצד הגחוני.
לאחר מכן, כאשר הצד הגחוני כלפי מעלה, מתחו בעדינות את הזחל והצמידו כל קצה לתחתית המנה. מיקום זה ישמור על הצבירים הגביים של נוירונים רב-דנדריטיים חושיים ותאי האפידרמיס הקשורים ללא פגע ככל שהדיסקציה מתקדמת.
השתמש מספריים לנתח לחתוך לאורך קו האמצע הגחוני של הזחל. הצמד את הקוטיקולה לצלחת כדי לשטח את ההכנה ולהסיר מבנים פנימיים כדי לחשוף את רקמת השריר הבסיסית. לאחר מכן, הסר בזהירות את השריר המתאים כדי לחשוף את האפידרמיס ולקבל גישה לנוירונים מוסתרים בעבר תוך שמירה על המורפולוגיה הדנדריטית שלהם.
בפרוטוקול לדוגמה, נראה הדגמה מפורטת של הכנת פילה הזחל והסרת שרירים כדי לראות נוירונים דה תחושתיים ותאי אפידרמיס.
- בתור התחלה, הוסיפו מספיק מלח קר לצלחת אלסטומר סיליקון כדי לכסות את המשטח התחתון. הוסף את הזחל הנושא לצלחת ומקם אותו מתחת למיקרוסקופ הסטריאו, תוך הבטחת מיקום נכון של האור. מקם את הזחל עם הצד הגחוני למעלה, אשר ניתן לזהות על ידי חגורות שיניים הבטן.
מותחים את הזחל בכיוון הקדמי-אחורי, ובעזרת סיכות חרקים מצמידים את הראש והזנב לתחתית המנה. בעזרת זוג מספריים מנתחים עדינים, חותכים לאורך קו האמצע הגחוני של הזחל מקצה לקצה. פרשו את הזחל פתוח ונעץ את רקמת הקוטיקולה בארבע הפינות כך שהיא תשכב שטוחה.
באמצעות מלקחיים, להסיר את האיברים הפנימיים, כולל CNS, מעיים, קנה הנשימה. התאימו את סיכות החרק כך שהפילה יהיה מתוח, אך לא מתוח באופן מקסימלי.
אתר את קו האמצע הגבי של הזחל, שבו רקמת שריר נעדרת ולאחר מכן מקם מלקחיים בחלק הפנימי של גבול זה. להחליק את השיניים בין השריר לאפידרמיס, תוך הקפדה על מזעור המגע עם האפידרמיס.
- כדי למזער את הנזק לאפידרמיס, יש לנתח עם השיניים השטוחות ביותר האפשריות. ונסו לנתח במי מלח המכילים סידן. זה יכול לעזור ליצור רווח בין השריר לבין האפידרמיס.
- לאחר מכן, משוך את המלקחיים כלפי מעלה כדי לשבור את החיבור של השריר לדופן הגוף בנקודת עיגון אחת. חזור על תהליך זה עבור קטעי השרירים הנותרים המעניינים.
התאימו מחדש את מכלאות החרקים כדי למתוח באופן מקסימלי את פילה הזחל לכל הכיוונים.