$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
- בלוטת הלימפה של הזחל Drosophila melanogaster אחראית לייצור המוציטים, או תאי דם, המסתובבים בהמולימפה הזחלית. כדי לזהות את בלוטת הלימפה, תחילה למצוא את כלי הדם הגב, או הלב, אשר שואב hemolymph בכל הגוף. עקוב אחר כלי הדם הגבי לכיוון הראש עד שתמצא את המוח. בלוטת הלימפה היא מבנה קטן, רב אונתי ליד המוח, האגף את כלי הדם הגבי.
כדי למצוא את האונה הראשונית, זהה את האונה הגדולה ביותר של הבלוטה. אונה זו מכילה שלושה אזורים, המוגדרים על ידי שלבים שונים של התפתחות המוציטים. האזור המדולרי הקרוב ביותר לכלי הדם הגבי מכיל המוציטים לא בוגרים, ואילו אזור קליפת המוח מכיל המוציטים בוגרים. בקצה האחורי של האונה הראשונית, אתה יכול למצוא את מרכז האיתות האחורי, המורכב המוציטים מיוחדים. האונות המשניות והשלישוניות קטנות יותר ואין להן אזורים מוגדרים.
כדי לנתח את בלוטת הלימפה, תזדקק למיקרוסקופ ניתוח, שני מלקחיים כדי לתפעל את הזחלים, ותמיסת מלח חוצצת.
בדוגמה זו, ננתח בלוטות לימפה לשימוש באימונוהיסטוכימיה.
- כדי להתחיל דיסקציה של בלוטת הלימפה, יש להוסיף מיליליטר אחד של 1x PBS לבאר אחת של צלחת בת 24 בארות עבור כל הגדרה ניסיונית שתינתח. לאחר מכן, באמצעות פיפטה העברה חד פעמית, להוסיף טיפה אחת של 0.1% PBST לכל באר. מניחים את הצלחת שטוחה על קרח. הניחו משטח ניתוח נקי על בסיס סטריאומיקרוסקופ מואר. השתמשו בפיפטת העברה חד פעמית כדי להניח טיפה של 0.01% PBST על התחבושת.
מעבירים זחל לטיפת PBST לנתיחה. החזיקו את הלבה עם זוג מלקחיים אחד, הצד הגבי כלפי מעלה, בערך 1/4 אורך מהקצה האחורי. עם זוג המלקחיים השני, תפסו את הקוטיקולה מיד לפני הזוג הראשון ומשכו בעדינות את הקוטיקולה הזחלית לכיוון החלק הקדמי, עד שקרסי הפה נחשפים.
שחררו את הקוטיקולה והשתמשו בשתי המלקחיים כדי לחתוך את הזחל. הסר את הקצה האחורי מטיפת PBST והשליך. הצמידו את הקוטיקולה ליציבות ולאחר מכן השתמשו בזוג המלקחיים השני כדי לתפוס את ווי הפה החשופים ולמשוך אותם בעדינות החוצה. זה יפריד את הקוטיקולה מהמבנים הפנימיים.
שמירה על ווים הפה, בזהירות להסיר מבנים לא רצויים, כגון בלוטות הרוק, הגוף השמן, ואת המעי. הרימו בעדינות את קומפלקס הרקמה המנותח על ידי ווי הפה והעבירו אותו לבאר של הצלחת על קרח. חזור על הדיסקציה עם כמה זחלים שתרצה, אך אל תחרוג מזמן דיסקציה של 30 דקות לפני שתמשיך לשלב הקיבוע.
כדי להתחיל בהרכבה של רקמות, הניחו טיפה של חיץ הרכבה על מגלשת זכוכית. בעזרת ווי הפה כידית, מעבירים את בלוטת הלימפה לטיפת החיץ. רווח את הרקמות באופן שווה, פיזור חיץ הרכבה בתהליך.
החליקו בזהירות טונג אחד של המלקחיים מתחת לכלי הגבי, ומשכו בעדינות לכיוון הפריפריה של חיץ ההרכבה כדי למשוך ולשטח את בלוטת הלימפה. בתנועת ניסור, חתכו את כלי הדם הגבי בין בלוטת הלימפה למוח. הרחיקו את שאר הרקמות מבלוטת הלימפה לקצה החיצוני ביותר של החיץ.
יש להחליק כיסוי נקי ולהוריד אותו בזהירות אל מאגר ההרכבה. השקופיות מוכנות כעת להדמיה או שניתן לאחסן אותן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לצורך.