דרוזופילה איסוף ביצים ודכוריוניציה: שיטה להסרת שכבת הביצה החיצונית ביותר

- אפשרו לדרוזופילה להטיל ביצים למשך הלילה על צלחת המכילה אגר בתוספת מיץ ענבים כדי לדמיין ביצים ומצופה בשמרים כדי לעודד זבובים להזדווג ולהטיל ביצים. כדי להסיר את הביצים, מוסיפים מים מזוקקים לצלחת ומנגבים בעדינות את פני השטח עם מברשת צבע. לאחר מכן יוצקים את התערובת דרך רשת ניילון הממוקמת בשיח פלסטיק כדי לאסוף את הביצים. משרים את הביציות בשני סבבים של 7% אקונומיקה כדי להסיר את הכוריון, או שכבת ההגנה החיצונית, מהעובר. תהליך זה נקרא dechorionation.

הביצים דבוקות כעת לצד השיח. שטפו אותם שלוש פעמים במים כדי להסיר את האקונומיקה. לבסוף, השתמשו במברשת צבע כדי להעביר את הביצים מהשיחים לבקבוקונים להמשך הפיתוח או לשימוש מיידי בניסוי. בפרוטוקול לדוגמה, נאסוף ונפרק ביצי דרוזופילה בתנאים סטריליים לזבובים אחוריים עם מיקרוביוטה מוגדרת.

- מניחים רשת ניילון לתוך שיח פלסטיק כדי להכין את המסננת לאיסוף ביצים. אם אותם זבובים ישמשו למחרת, העבירו אותם מיד לכלוב חדש המכיל צלחות אגר מיץ ענבים שמרים טריים. צלחת מיץ הענבים בכלוב הקודם מכילה את ביצי זבוב הפירות. הסר זבובים מתים עם מברשת צבע נקייה, והיזהר לא לשבור את האגר. שוטפים את צלחת האגר במים מזוקקים ומברישים בעדינות את הביצים מפני השטח של האגר ואז יוצקים את הבוצה על הרשת כדי לאסוף את הביצים.

יש לעקר את ארון הבטיחות הביולוגית באתנול 70% ולאחר מכן להדליק את אור ה-UV. רססו את כל הציוד הלא ביולוגי באתנול 70% והכניסו אותם מיד לארון הבטיחות הביולוגית, ולאחר מכן עקרו אותם באור UV.

- זה קריטי כדי להבטיח כי טכניקה אספטית טובה מתורגל בעת עבודה בתוך או בעת הוספה או הסרה של חומרים חדשים לארון בטיחות ביולוגית.

- מעבירים את השיחים עם הביצים לכוס דגימה של 120 מיליליטר ויוצקים באיטיות 90 מיליליטר של תמיסת נתרן היפוכלוריט 0.6%, או 7% אקונומיקה, לתוך השיח, ממש מתחת לשפה. באמצעות מלקחיים, מעת לעת להזיז את bushing למעלה ולמטה בתמיסה כדי להשעות מחדש את הביצים. מעבירים את השיחים ישירות לכוס דגימה שנייה ממולאת מראש ב-90 מיליליטר אקונומיקה.

בסוף טיפול האקונומיקה השני, הביצים צריכות להתחיל להיצמד לצידי השיח. השליכו את האקונומיקה ושטפו לחלוטין את השיח במים סטריליים. שוב, השתמשו במלקחיים כדי להשעות את הביצה מספר פעמים במהלך כל שטיפה. בסוף השטיפה השלישית, רוב הביצים צריכות להיות מחוברות לצד השיח.

בעזרת מברשת צבע סטרילית מעבירים את הביצים מהצד של השיחים לתזונה סטרילית. השאירו את הפקקים רופפים כדי לאפשר לחמצן להיכנס לצינור. הביצים המועברות ייראו על פני השטח של הדיאטה.