Counting Colony Forming Units (CFUs): כימות חיידקים מגופי זבובים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:55 דק׳ • April 30th, 2023
- ראשית, לאסוף זבובים בשלב הרצוי של התפתחות ולשים אותם בתוך צינור סטרילי. כדי לספור רק את המיקרוביוטה הפנימית, עקרו את החלק החיצוני של הזבובים על ידי טבילתם באתנול 70%. כדי למדוד את המיקרוביוטה הפנימית והחיצונית, דלגו על שלב העיקור הזה. לאחר מכן, טחנו את הזבובים בכמות קטנה של מצע גידול חיידקים באמצעות חרוזי קרמיקה והומוגנייזר רקמות, או באופן ידני עם מזיק. יש להקפיד לא להכניס חיידקים ממקורות חיצוניים, כדי למנוע זיהום הדגימות.
כעת אמורה להיות לכם תערובת הומוגנית המכילה חיידקים שתוכלו לגדל בתרבית. העלה את נפח ההומוגנט באמצעות מדיום חיידקי נוזלי. בצע דילולים סדרתיים של ההומוגנט וצלחת נפח קבוע של דילולים אלה על מצע הגידול המוצק המתאים עבור החיידקים שלך. ככל שהחיידקים גדלים, ייווצרו מושבות על הצלחת. מצא את הדילול שיש לו טווח של 10 עד 100 מושבות כדי לקבוע את יחידות יצירת המושבה, או CFU, של המדגם.
בפרוטוקול לדוגמה, נחסן זבובים סטריליים בתרבית חיידקים גנוטוביוטית או מוגדרת ונאסוף ונמדוד CFUs.
- השתמש בקצוות מסנן כדי להעביר 100 מיקרוליטר של צמיחה בלילה לצינור מיקרופוגה סטרילי. לאחר מכן, להעביר 200 מיקרוליטר של כל תרבות צלחת 96 באר. הוציאו את הדגימות מארון הבטיחות הביולוגית וצנטריפוגו אותן כדי להוציא את החיידקים. לאחר ביצוע דילול של פי אחד, שניים וארבעה, מדדו את הצפיפות האופטית או OD600 על ספ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים