עיבוד רגלי חרקים למיקרוסקופ פלואורסצנטי: שיטה לשימור מבנים עצביים-שריריים לדימות

- כדי להתחיל, לטבול חרקים מורדמים בתמיסת אתנול 70% כדי להפחית את ההידרופוביות של הקוטיקולה. לאחר מכן, שטפו וחדרו את הרקמה במי מלח חוצצים פוספט המכיל חומר ניקוי למשך 30 דקות לפחות כדי לאפשר חדירת רקמות במהלך הקיבוע.

לאחר מכן, להסיר את הראש והבטן מבית החזה. השתמש במלקחיים כדי להפעיל לחץ עדין על צומת קוקסה-בית החזה, ולנתק את הרגל. הניחו בזהירות את הרגליים בתמיסת פרפורמלדהיד 4% קרה כקרח למשך הלילה כדי לאפשר לה לחדור לרקמה. Paraformaldehyde מתקן רקמות על ידי cross-linking חלבונים.

לאחר מכן, להסיר את פתרון הקיבוע ולשטוף את הרקמה מספר פעמים עם מלוחים חוצץ פוספט המכיל דטרגנט. לפני ההרכבה, הניחו את הרגליים במאגר הרכבה טהור או מדולל מעט למשך יום אחד לפחות כדי לספק מספיק זמן למאגר להיכנס לרקמה.

לבסוף, הר את הרגליים בטיפה של מדיום הרכבה. השתמשו במרווח בין מגלשת המיקרוסקופ לבין הכיסוי כדי למנוע נזק לדגימה, ואבטחו את התושבת באמצעות לק.

בדוגמה הבאה, נראה את הדיסקציה, הקיבוע וההרכבה של רגלי Drosophila melanogaster.

- התחל על ידי מילוי המספר המתאים של בארות בצלחת זכוכית multiwell עם 70% אתנול. השתמשו במברשת כדי להוסיף 15 עד 20 זבובים מורדמים של פחמן דו חמצני מכל גיל או מין לכל באר, וטפחו בעדינות את הזבובים לתוך האתנול עד שהם שקועים לחלוטין.

לאחר לא יותר מדקה, שטפו את הזבובים שלוש פעמים בתמיסת חומר