אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 4:39 דק׳ • April 30th, 2023
- התחילו בפעימת דרוזופילה מורדמת יחד עם חיץ בבלנדר כדי לפרק זבובים לחתיכות קטנות. מסננים את התערובת דרך רשת כדי להסיר את חלקי הגוף הגדולים. לאחר מכן, הניחו לביצים לשקוע בעוד השברים הגדולים יותר נשארים על פני השטח וניתן להסירם.
חזור על תהליך זה באמצעות רשת קטנה יותר כדי להסיר לכלוך נוסף. אספו את הביצים בבקבוקון, ואם רוצים לטפל בביצים בתרופה, עשו זאת בשלב זה. לאחר מכן, להסיר את הנוזל ולהחליף אותו עם קיבוע. מוסיפים הפטן כדי לעזור לקיבוע לחדור את הקרום המקיף את הביצה.
לאחר מכן, שטפו את הקיבוע עם PBS. כדי להכתים את הביציות, הסירו את הקרומים החיצוניים המגינים כדי לאפשר חדירת נוגדנים. פיפטה את הביציות על החלק החלבי של מגלשת זכוכית. מניחים כיסוי מעל הביצים ומגלגלים בעדינות את הכיסוי בתנועה קדימה ואחורה כדי להפריד מכנית את קרום הכוריון והויטלין מהביצה. הביציות מוכנות כעת להכתמה.
בפרוטוקול לדוגמה, נכין ביציות במיוזה I כדי להכתים ולדמיין את מנגנון הציר.
- כדי להתחיל, לחתוך מראש את החלק הפנימי של צינור 5 מיליליטר פיפטה פסטר עם PTB כדי למנוע הביציות להידבק על המשטחים. הוסיפו 100 מיליליטר מהחיץ של רוב לבלנדר ואז הוסיפו 100 עד 300 זבובים מורדמים והפעילו פולסים שלוש פעמים למשך שנייה אחת.
סננו את הבוצה המתקבלת לתוך של 250 מיליליטר דרך רשת גדולה עם נקבוביות של כ -1500 מיקרומטר. תנו לתסנין להסתפק בכש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים