הפרעה בקוטיקולה: שיטה לאיסוף המולימפה מזחלי דרוזופילה

- כדי להתחיל, פיפטה טיפה של חיץ על כרית ניתוח נקי. לאחר מכן, מניחים זחל חי מיובש על הטיפה. דרוזופילה, כמו פרוקי רגליים אחרים, יש מערכת דם פתוחה שבה הלב פועם המולימפה ברחבי הגוף, רוחץ את האיברים הפנימיים. כדי לשחרר את ההמולימפה, שהיא הדם המשולב ונוזל interstitial של פרוקי רגליים, להשתמש מלקחיים ולפתוח את הקוטיקולה, כיסוי חיצוני נוקשה למחצה של הזחלים.

לאחר מכן, השליכו את הפגר והעבירו את תמיסת ההמולימפה מצלחת הניתוח לתמיסת חיץ מקוררת בצינור מיקרוצנטריפוגה. לבסוף, השתמש בהמוציטומטר כדי לספור את מספר ההמוציטים, התאים בהמולימפה, שנאספו. בפרוטוקול זה, נאסוף המולימפה מזחלי Drosophila melanogaster.

- התחל באיסוף המולימפה על ידי הוספת 10 מיקרוליטר של 1x PBS לצינור מיקרוצנטריפוגה, והנחת הצינור על קרח. לאחר מכן, הניחו טיפה של 10 מיקרוליטר של 1x PBS על משטח ניתוח נקי. בחר זחל בודד, ולייבש אותו על ידי הנחתו על מגבון רקמות. לאחר מכן העבירו אותו לטיפת PBS בכרית הנתיחה.

בעזרת מלקחיים, קרעו בעדינות והפכו את הקוטיקולה כדי לשחרר את ההמולימפה, ולאחר מכן השליכו את הפגר. בעזרת פיפטה, לאסוף את hemolymph מן כרית ניתוח. מוסיפים את ההמולימפה לצינור המיקרוצנטריפוגה הקר PBS, ומערבבים על ידי פיפטינג למעלה ולמטה. טען 10 מיקרוליטר של הדגימה לתוך תא hemocytometer ולקחת קריאת ריכוז.