JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 3:56 דק' • April 30th, 2023
- בזבוב הבוגר, שרירי הטיסה העקיפה, או IFMs, הם השרירים הגדולים ביותר של הזבוב המשתרעים על פני כל בית החזה. ה-IFMs מתזמרים את תנועות הכנפיים האופייניות בתדר גבוה בזבובים דו-כנפיים, כולל דרוזופילה. שתי קבוצות סיבי שריר מנוגדות מרכיבות את ה-IFMs.
ראשית, השרירים האורכיים הגביים, או DLMs, ממוקמים לאורך המישור החציוני של בית החזה מעל המעי ומשתרעים מהקדמי לאחורי. שנית, שרירי הגחון הגביים, או DVM, משתרעים מהחלק העליון עד התחתון של בית החזה ומוקפים על ידי שריר ה-TDT, או שריר הקפיצה. שתי קבוצות השרירים מחוברות לקוטיקולה.
כ-48 שעות לאחר היווצרות הבובות, או APF, ניתן לזהות חזותית IFMs שהבשילו באמצעות מיקרוסקופ דיסקציה פשוט. בפרוטוקול לדוגמה, נאסוף IFMs מגלמים שגילם עולה על 48 שעות APF לצורך ניתוח תפוקה גבוהה.
- לדיסקציה IFM לאחר APF של 48 שעות, השתמש במברשת צבע רטובה קלות כדי להעביר את הגלמים המבוימים לרצועה של סרט דביק דו-צדדי המורכב על שקופית מיקרוסקופ. כיוון הגלמים בשורה, צד הגחון כלפי מטה והחלק הקדמי לכיוון תחתית המגלשה. לאחר שכל הגלמים הונחו, השתמשו במלקחיים כדי להפריד ולפתוח את מארז הגלמים הראשון מעל הספירקלים הקדמיים, והחליקו בעדינות זוג מלקחיים לכיוון האחורי, תוך חיתוך מארז הגלמים תוך כדי תנועת המלקחיים.
שחררו את הגלמים מהמארז שנפתח, והעבירו מיד את הגלמים לטיפת PBS במגלשת מיקרוסקופ שנייה. כאשר כל הגלמים משתחררים, השתמשו במספריים עדינים כדי לחתוך את בטן הגלמים הרחק מבית החזה ודחפו את הבטן לערימה נפרדת. לאחר הסרת כל בתי החזה, השתמש בפיסת נייר טישו כדי להסיר את רוב PBS ואת ערימת הבטן.
הוסיפו טיפה של PBS טרי וצונן לבית החזה הנותר לפני שתשתמשו במספריים כדי לחתוך מהראש לאורך ציר הגוף האורכי בתנועה אחת כדי לחלק את בית החזה לשניים. לאחר שכל הגלמים נותחו, השתמש במלקחיים מספר חמש כדי לבחור אחד מהמיסקטורים והכנס בעדינות את קצות המלקחיים מעל ומתחת לאמצע ה- IFMs.
מחזיקים את זוג המלקחיים הראשון ללא תנועה, השתמשו במספריים עדינים כדי לחתוך קצה אחד של ה-IFM הרחק מהקוטיקולה והגידים לפני סיבוב הגולם, 180 מעלות, כדי לאפשר לקצה השני של ה-IFM להשתחרר מהציפורן והגידים. השתמש במלקחיים כדי להעביר את צרור IFM מבית החזה לקצה בועת PBS באמצעות מתח מים כדי להחזיק את הצרור במקומו.
לאחר מכן, דחוף את הפגר לצד הנגדי של המגלשה ונתח את שאר ה- IFMs באותו אופן. לאחר שכל ה-IFMs נאספו, השתמש במלקחיים מספר חמש כדי להסיר כל שריר קפיצה או שברי ציפורן שאולי מצאו את דרכם לדגימות. לאחר מכן, השתמש במתח מים כדי ללכוד בעדינות את ה- IFMs המנותחים בין זוג מלקחיים והנח את ה- IFMs בצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר המכיל 250 מיקרוליטר של PBS מקורר.