בדיקת אולפקטומטר ארבע-כיוונית: שיטה להערכת תגובות מרומזות ריח בדרוזופילה

- אולפקטומטר ארבע-כיווני הוא תא סגור עם יציאות חד-כיווניות בכל פינה, דרכן הוא יכול לספק עד ארבעה ריחות, וליצור רבעים עם פרופילי ריח ברורים. התחל ניסוי על ידי העברת זבובים ערים לתוך החדר. הימנעו מהרדמה, שכן הדבר עלול להשפיע על התנהגותם במהלך הניסוי.

חשפו את הזבובים לאוויר נקי והתבוננו בתנועותיהם כדי לוודא שאין ריחות שמזהמים את מד הריח ומשפיעים על התנהגות הזבובים. לאחר מכן, הכינו את ריחות הבדיקה בבקבוקונים נפרדים וחברו אותם לתא הראשי דרך היציאות החד-כיווניות. חשוף את הזבובים לריחות לתקופה מוגדרת מראש, והסר את הגירוי לאחר סיום הניסוי.

זבובים נוטים להימנע מרבעים עם ריחות דוחים תוך כדי תנועה והתיישבות ברבעים עם ריחות אטרקטיביים. מדוד את התגובות ההתנהגותיות של הזבובים המושפעים מריח על ידי מעקב אחר מיקומם לאורך זמן בזמן שהם חוקרים את האולפקטומטר.

בפרוטוקול הבא, נשתמש באולפקטומטר בעל ארבעה רבעים עם מערכת העברת אוויר כדי לנתח את התנהגות הזבובים בתגובה לאתיל פרופיונאט, חומר דוחה ריחות וחומץ תפוחים, שהוא אטרקטיבי.

- לפחות חמש דקות מראש, הפעילו את בקר הטמפרטורה וכוונו אותו ל-25 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, חברו את תאי הריח לזירה באמצעות צינור פלסטיק. בדוק את קצב זרימת האוויר בכל רביע של הזירה באמצעות מד זרימה אלקטרוני. ודא כי הבקרה והריח וזרמי האוויר פועלים שניהם במהירות של 100 מיליליטר לדקה.

- זבובים רגישים מאוד לזרימת אוויר, וקריטי לאמת את זרימת האוויר בכל רביע לפני כל ניסוי.

- כעת, נקו את הזירה ואת לוחות הזכוכית באמצעות 70% אתנול. נגבו את כל החלקים פעמיים עד שלוש ואפשרו להם להתייבש לחלוטין באוויר לפני שתמשיכו. לאחר מכן, הדקו את לוחות הזכוכית לזירה. לאחר מכן, העבירו את הזבובים לזירה ללא הרדמה. באמצעות כוח הכבידה, תן להם להיכנס דרך החור באחד לוחות הזכוכית, ולאחר מכן לכסות את החור עם רשת עגולה.

כעת, מקמו את הזירה עמוסת הזבובים לתוך התא האטום לאור. לאחר מכן, חברו את ארבעת זרמי האוויר השולטים לכל פינה בזירה. סגרו את דלת החדר ותנו לזבובים להתאקלם בסביבה החדשה למשך 10 עד 15 דקות.

לאחר תקופת ההתאקלמות, ערכו ניסוי בקרה של 5 עד 10 דקות שבו הזבובים נחשפים לארבעה זרמי אוויר בקרה. חיוני כעת לנתח את הנתונים באופן מיידי. אם הזבובים אינם מפוזרים באופן שווה בזירה, יש לאפס את הזירה.

- זה קריטי לבדוק את ההתנהגות של זבובי בקרה רק אוויר נקי. פעולה זו תוודא במהירות שכל תנאי הרקע תקינים. אור דולף, חוסר איזון בטמפרטורה, זירה מוטה או זיהום ריח יכולים כולם לגרום לבעיות.

- במידת הצורך, השליכו את הזבובים ונקו שוב את הזירה. אם יש חשד לזיהום ריחני, החליפו את כל הצינורות. המשיכו לחזור על מבחן הבקרה עם קבוצות חדשות עד שהחיות לא יראו העדפה לאף אחד מארבעת הרבעים. לאחר מכן, חבר את תא הריח להתקנה באמצעות שסתום תלת-כיווני, או חבר מחדש את הצינורית והפעל ניסוי בדיקה במשך 5 עד 10 דקות. עבור הקלטות ניסיוניות ארוכות יותר, עצור והפעל מחדש במהירות את תוכנית המעקב כל 20 דקות, אחרת קבצי הנתונים יהיו גדולים מדי.

בין בדיקה לבדיקה, השליכו את הזבובים, נקו את הזירה ואת לוחות הזכוכית באתנול 70% והחליפו את צינורות המחברים. שמור על זרימת האוויר היבש הולך לשטוף את המערכת ללא הרף. ליעילות, טוב שיהיו שתי זירות כך שניתן יהיה לבצע ניקוי במהלך ריצות.

- אם נערכים מספר ניסויים באותו יום, יש לנקוט משנה זהירות כדי לוודא שלא נותר ריח במערכת מריצה קודמת. זה בדרך כלל לא בעיה עם ריכוזים נמוכים של ריח או עם CO2. אבל עבור גירויים מרוכזים מאוד, ייתכן שיהיה צורך בפער של עד 24 שעות בין ריצות הניסוי.