JoVE Encyclopedia of Experiments
ביולוגיה
0 צפיות • 4:28 דק' • April 30th, 2023
- מבוך Y מורכב ממחבר בצורת Y עם שלושה בקבוקוני זבוב המחוברים אליו באמצעות צינורות ישרים או מחודדים. זבובים נעים במבוך לכיוון הצד עם הגירוי שהם מעדיפים. כדי להתחיל את הניסוי, הניחו נייר טישו עם התמיסה המכילה את הכימיקלים הנדיפים לתוך כל בקבוקון. לאחר מכן, חבר אותם לצינורות המחודדים. הצינורות המחודדים מגבילים את יכולתם של הזבובים לחזור למרכז המבוך ומאטים את פיזור הכימיקלים הנדיפים.
לאחר מכן, זבובים מורעבים צוננים כדי להאט אותם. אין להשתמש בהרדמה כימית, שכן הדבר עלול להשפיע על תוצאות הבדיקה. חברו במהירות את הבקבוקון עם הזבובים המצוננים לצד האחרון של המבוך. השאירו את הזבובים לחקור את המבוך. כדי להפחית כל העדפה הנגרמת על ידי אור בהיר, לבצע צעד זה תחת אור אדום רחוק, אשר זבובים לא רואים. לבסוף, ספרו את הזבובים בכל צד של המבוך. מיקומם במבוך מעיד על העדפתם לריח כימי נדיף זה.
בפרוטוקול לדוגמה, נראה התקנה של מבחן מבוך Y עם סוג פראי Drosophila.
- לפני ביצוע הבדיקה למחרת בבוקר, בסוף היום, להעביר קבוצות של 10 עד 20 שורות ניסוי לבקבוקוני זכוכית עם לחות מסופקת ממגבת רטובה. הזבובים חייבים להיבדק תוך 16 עד 18 שעות, אחרת הם עלולים למות כתוצאה מיובש או רעב. למחרת, הרכיבו את מבוך Y. התחל על ידי חיבור המחבר בצורת Y לשני בקבוקוני זכוכית באמצעות מחברי קצף עם קצוות פיפטה גזוז אשר יוצרים את הצינורות. צורתם המתחדדת הופכת את המעברים החד-כיווניים האלה.
הענף השלישי של האות "Y" מחובר לצינור טעינה, עשוי מהחלק הגדול של קצה פיפטה, ומאפשר מעבר מבקבוקון הטעינה לנקודת הבחירה של המבוך. מעבר לכל מנהרה מתחדדת יש בקבוקון זכוכית, שאחד מהם חייב להיות טעון בריח. העמיסו אותם כבולוסים של 40 מיקרוליטר ספוגים בריבועים של נייר טישו בקוטר 28 מילימטר. איזה מהשניים מכיל את הריח צריך להחליף באופן אקראי.
כדי לבצע את הבדיקה, תחילה לקרר את הזבובים על קרח לזמן קצר, כך הזבובים מאטים. זה צריך להיות תחת אור אדום רחוק מנורות לד וב 25 מעלות צלזיוס. שחררו בעדינות את קבוצת הזבובים לתוך בקבוקון הטעינה והעמיסו את מבוך ה-Y בזבובי המבחן. אין להשתמש בהרדמה גזית.
- ממש קריטי להעביר את הזבובים לבקבוקון ההעמסה במהירות ובעדינות. זהו למעשה השלב הקשה ביותר בניסוי הזה מכיוון שזבובים צריכים להתעורר במהירות לפני פיזור הריחות במבוך Y.
- יש לאפשר לזבובים לחקור את המבוך במשך 24 שעות, כך שמספר מקסימלי של זבובים יעבור לבקבוקון זכוכית זה או אחר. מספר הזבובים הנמצאים בצינורות השונים משמש לחישוב מדד הריח. שיטות סטטיסטיות סטנדרטיות יש ליישם על ערך זה, שנאסף מהתנהגות של עד 10 זבובים.
אם קבוצות של 10 זבובים אינן מספקות תוצאות עקביות, ניתן להפעיל את הניסויים עם קבוצות של 20 זבובים. כדי לנקות את רכיבי המבוך, השרו אותם, מפורקים, ב- RBS 35 MD למשך הלילה. לאחר מכן יש לבצע שטיפה במי ברז ושטיפה סופית במי DI לפני ייבוש באוויר.