אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:08 דק׳ • April 30th, 2023
- התחילו בבחירת זחל אינסטאר שלישי, הגדול מבין צורות הזחל, ממדיום התרבית, ושטפו אותו במים כדי להסיר מזון. מכיוון שעיני הזחל, או איברי בולוויג, ממוקמים בחלק הקדמי העליון של הזחל, הניחו את הזחל במרכז צלחת אגר עם מקור האור מעל החיה. כבו את אור החדר ואפשרו לזחל להתאקלם לחושך.
מכיוון שהזחל בקושי ניתן לזיהוי בנקודת אור שנוצרה על ידי אור נראה, הפעל נורות LED אינפרא אדום כדי להאיר את החיה עבור המצלמה. חכו עד שבעל החיים יתחיל לזחול ישר כדי לשלוט על נתיבו. ואז לסובב את הצלחת כך הזחל זוחל ישירות לכיוון נקודת האור. תעד את בעל החיים זוחל לתוך האור ואז הרחק מנקודת האור. טקטיקה זו של הימנעות מאור מסייעת לזחלים להימנע מטורפים על ידי התחפרות במזון.
בדוגמה הבאה, נבצע את בדיקת נקודת האור כדי לבחון את יכולתם של זנים גנטיים שונים של זחלי דרוזופילה לברוח מהאור.
- לפני הצגת הזחל למערך ההדמיה, רכשו סרטון קצר של מיקום התאורה, וקראו לסרטון רקע הבקרה הלא מסונן "lightarea1". החזירו את הפילטר לעדשת המצלמה, והדליקו אור רחוק ממכשיר הניסוי במצב נמוך ככל האפשר, תוך מתן אפשרות לראות בבירור את הזחלים. השתמשו בכפית כדי להסיר חלק מהזחלים ממדיום התרבית, ובחרו בעדינות זחל אינסטאר שלישי.
שוטפים את הזחל במים מזוקקים, ומניחים את הזחל במרכז צלחת האגר. הסר בעדינות את עודפי המים מהזחל, וכבה את אור החדר. אפשרו לזחל להתאקלם במשך שתי דקות בסביבה חשוכה לפני שתדליקו את נורת ה-LED האינפרא-אדומה. ניסוי ההתנהגות הבא של הימנעות מאור צריך להתבצע בחושך. לנוחיות ההדגמה, צילמנו באור הבהיר.
מברישים בעדינות את הזחל למרכז הצלחת. כאשר הזחל מתחיל לזחול ישר, סובב את הצלחת כדי לגרום לזחל לפנות לכיוון נקודת האור. לחץ על לכידה, הגדרה ולכידת וידאו כדי לבחור את נתיב השמירה. ולחץ התחל להקליט כדי להקליט. אפשרו ללבה לזחול לקראתה, להיכנס אליה ולעזוב אותה עד שהיא כמעט מחוץ לשדה הראייה, ואז לחצו על 'הפסק הקלטה'.
הרחיקו את המסנן מהמצלמה ורכשו סרטון קצר של מיקום נקודת האור. לאחר מכן תן שם לפוסט כסרטון לא מסונן, "lightarea2", והשווה סרטון זה לסרטון "lightarea1" כדי להבטיח שמיקום נקודת האור לא ישתנה.