בדיקת חום מקומית: שיטה להערכת נוסיספטציה של טמפרטורות גבוהות בזחלי דרוזופילה

- להכין זחלי דרוזופילה לבדיקת חום, לאסוף בעלי חיים בשלב ההתפתחותי הרצוי, ולהעביר זחלים בודדים לצלחת בדיקה עם סרט דק של מים. המים מאפשרים לזחלים לנוע בחופשיות מבלי להידבק למשטח הצלחת.

זחלי דרוזופילה מזהים גירויים תרמיים מזיקים דרך נוירונים חושיים רב-דנדריטיים באפידרמיס שלהם המכונים נוציצפטורים. אלה אינם יורים עד שמגיעים לסף חושי מסוים, כגון טמפרטורות גבוהות שעלולות להזיק.

כוונו את גשושית החום לטמפרטורה שתתגבר על סף חושי זה, ותגרום לנוציצפטורים לירות. לחץ בעדינות על קצה הבדיקה כנגד הזחל כדי להפעיל חום. הזחל יגיב לטמפרטורה הרעה בהתנהגויות תרמו-נוסיצפטיביות, וייסוג מהבדיקה. עצור כאשר הזחל מפגין תפקיד של 360 מעלות הרחק מגשושית החום, או כאשר חלף זמן מוגדר. רשום את זמן התגובה.

בפרוטוקול לדוגמה, נראה הדגמה של בדיקת חום מקומית על זחלי דרוזופילה של כוכב שלישי מוקדם.

- ראשית, הגדר מראש את הטמפרטורה של הבדיקה התרמית לנקודת ההגדרה הרצויה. השתמש במברשת צבע או מלקחיים כדי להעביר בעדינות זחל בודד על פלטפורמה שטוחה, להבטיח כי הלבה מכוסה על ידי סרט דק של מים.

- על מנת למזער את השונות בלחץ, כמו גם כדי להבטיח את המיקום הנכון ואת הזווית של בדיקת החום, בפועל עושה מושלם.

- לחץ בעדינות על קצה הגשושית כנגד הזחל בקטע A4, תוך הפעלת לחץ קל עם הקצה בזווית של כ-45 מעלות בין הגשושית לפני השטח של הזחל. הלחץ אמור לגרום לשקע קל על פני הזחל, ובדרך כלל יספיק כדי למנוע תנועה. המשיכו לגרות את הזחל עד להופעת תגובת נסיגה או עד שמגיעים לחיתוך של 20 שניות.

הזחלים המגיבים בדרך כלל מראים תחילה התנהגות ראשונית של הרמת הראש והזנב, ולאחר מכן התנהגות נסיגה של גלגול של לפחות 360 מעלות. לאחר התחלת התנהגות הנסיגה, שחררו את הקשר עם הגשושית ותיעדו את זמן ההשהיה, או הזמן שנדרש לנסיגה. אם לא נצפתה התנהגות נסיגה תוך 20 שניות, הזחל אינו מגיב.