בדיקת שיפוע טמפרטורה: שיטה לבדיקת העדפת טמפרטורה בזחלי דרוזופילה

- כדי לבדוק את העדפת הטמפרטורה של זחלי דרוזופילה, צור שיפוע טמפרטורה על ידי חימום צד אחד של צלחת בדיקת אלומיניום וקירור הצד השני. אלומיניום הוא בעל מוליכות תרמית גבוהה, כלומר החום מועבר ביעילות, ויוצר שיפוע טמפרטורה ליניארי יציב. לאחר שהמערכת התאזנה, רשמו את הטמפרטורות על פני הצלחת באזורי טמפרטורה באותו גודל, ולאחר מכן טענו את מרכז הצלחת בזחלים נקיים.

כסה את המערכת כולה כדי למנוע הפרעות מאור בהיר והתחל את גירסת הניסיון. הזחלים מתפשטים דרך השיפוע, נמנעים מאזורים מרתיעים חמים מדי או קרים מדי, ומתיישבים באזורים של טמפרטורות נוחות. התנהגות זו נקראת thermotaxis. כדי להעריך את העדפת הטמפרטורה של הזחלים, רשום את מספר בעלי החיים בכל אזור טמפרטורה.

בפרוטוקול לדוגמה נראה כיצד להגדיר שיפוע טמפרטורה חד-כיווני בין 18 ל-28 מעלות צלזיוס, וכיצד מטפלים בזחלים במהלך הבדיקה.

- כדי להכין שיפוע חד כיווני, ראשית, ליצור סביבה לחה עבור הבדיקה. הניחו שני בלוקים מאלומיניום המחוברים לאמבטיות מים נפרדות על מגבות נייר רטובות במרחק של 10 סנטימטרים זה מזה. יש לחמם את אמבטיות המים מראש. לאחר מכן, לעשות 100 מיליליטר של 1% agarose ולהוסיף 25 מיליליטר לכל צלחת הבדיקה על משטח ישר. לאחר שהאגרוז התמצק, שפשפו בעדינות את פני השטח עם ספוג מלמין כדי להפוך את פני השטח לגס מעט.

לאחר מכן, כדי לקדם העברת טמפרטורה יעילה, מלא את כל הרווחים בין בלוקי האלומיניום בצלחות הבדיקה במים המועברים מבקבוק תרסיס. כעת, הניחו את לוחות הבדיקה על בלוקי האלומיניום וודאו שהתיחום הוא 2 סנטימטרים מכל קצה כדי להתאים בדיוק לקצוות של בלוקי האלומיניום.

לאחר מכן, רססו סרט מים על פני הצלחות כדי שהג'לים לא יתייבשו. לאחר מכן, לכסות את המערכת עם קופסת קרטון כדי להפחית אידוי ולעזור לייצב את הטמפרטורה של משטח הג'ל. המתן 5 עד 10 דקות כדי לאפשר לטמפרטורה להתאזן. לאחר מכן, בדוק את טמפרטורת פני השטח על הצלחת בלפחות 12 מקומות כדי לוודא שיש טמפרטורה אחידה לאורך כל הדרך, לתת או לקחת 2 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, החלף את מכסה הקופסה עד לביצוע הבדיקה.

ראשית, הסר את קופסת הקרטון מעל הג'ל ובדוק במהירות את טמפרטורת פני השטח של הג'ל. אם המשטח יבש, רססו כמות קטנה של מים על המשטח. אם הג'ל טוב, אז לטעון 100 עד 200 זחלים במרכז כל צלחת באמצעות מברשת צבע קטנה. לאחר מכן, הניחו מכסה מעל כל צלחת בדיקה כדי ללכוד את הזחלים וכסו את ההתקנה בקופסת קרטון כדי למנוע חשיפה לאור. הבדיקה נמצאת כעת בעיצומה.

לאחר 10 עד 30 דקות, הסר את קופסת הקרטון ואת מכסה צלחת המיקרו. לאחר מכן, צלמו את הלוחות מלמעלה כדי לתעד את מיקום הזחלים. הניחו את הקופסה מעל המצלמה כדי למנוע השתקפות על פני הג'ל. כדי לנקות את הצלחת, שאפו את כל הזחלים בכל מקום שבו התפזרו.

כעת, חשב את התפלגות האחוזים של הזחלים בכל אזור באמצעות תוכנת ניתוח תמונה. עשו קווים כל 2 סנטימטרים בהתבסס על התיחום על לוח הבדיקה וספרו את מספר הזחלים בכל אזור.

- בעת הספירה יש להתעלם מהזחלים המפוזרים באזורים המרוחקים 0.5 סנטימטרים מכל קצה. עובי הג'ל ותנאי הטמפרטורה אינם אחידים בסמוך לקצה.