אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
ביולוגיה
0 צפיות • 3:01 דק׳ • April 30th, 2023
- בזבובי דרוזופיליה, גירוי חזותי מתקרב המסמן את התקרבותו של טורף מפעיל מעגלים עצביים המפעילים תגובת בריחה. כדי לתפעל את המעגל העצבי השולט בתגובה כזו, בטאו אופסין מהונדס ורגיש לאור, כמו צ'נלרודופסין-2 בתאי עצב ספציפיים בתוך אותו מעגל.
Channelrhodopsin הוא ערוץ קטיון רגיש לאור שנפתח כאשר הוא נחשף לאור כחול בהיר. הזרימה הבאה של יוני נתרן מגדילה פוטנציאל פעולה שגורם לנוירון לירות ולהעביר מידע לאורך המעגל. בנוסף לגירוי האור, הקו-פקטור all-trans-retinal נדרש עבור channelrhodopsin להיפתח.
לכן, לספק all-trans-retinal במזון זבוב, שכן הוא נמצא בדרך כלל בכמויות קטנות מאוד. נוסף על כך, כאשר חוקרים את תפקידם של תאי עצב במעגל עצבי המעורב בתגובה לגירוי חזותי, השתמשו בזבובים עיוורי ראייה כדי למנוע תגובות אור אחרות.
לבסוף, השתמש באור LED כחול כדי להפעיל את אותה התנהגות הנגרמת על ידי הגירוי המגיע. בפרוטוקול לדוגמה, נראה את הכנת המזון ואת התגובה ההתנהגותית הנגרמת על ידי אור של זבובים המבטאים צ'אנלרודופסין בנוירונים של האונה הראייתית.
- התחילו בהמסת מזון סטנדרטי מקמח תירס במיקרוגל, ותנו לו להתקרר עד שהוא חם למגע. לאחר הקירור, ערבבו 50 מיקרוליטר של 20 מילימולר שהוכן בעבר בכל בקבוקון. לאחר מכן, הניחו לבקבוקונים להתקרר ושמרו מוגנים מפני אור עד לצורך.
ראשית, הרדימו בקצרה את הזבובים על קרח. לאחר מכן, הניחו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים