דיסקציה של המעי התיכון מזבוב בוגר: שיטה לבידוד מערכת העיכול

- כדי להתחיל, להסיר את הראש מזבוב בוגר מורדם. כסו את הזבוב הערוף בתמיסה המכילה מלח חוצץ פוספט, או PBS, ואלבומין בסרום בקר, או BSA, כדי למנוע התייבשות. החזיקו את הזבוב ליד בית החזה עם מלקחיים, ואז משכו את הבטן עם זוג מלקחיים שני כדי לחשוף את המעיים. מכיוון שהיבול, או שק אחסון המזון, יהיה מחובר לבית החזה, משכו בעדינות את המעיים מבית החזה.

לאחר ניתוק, למשוך את היבול מן הבטן כדי לפתוח את המעיים. משוך את הקצה האחורי של הזבוב כדי להתחיל לשחרר את המעי מחלל הבטן. המשך למשוך את המעיים כדי למשוך את כל הרקמה מתוך הבטן. לאחר השחרור, הסירו את המעי הקדמי, הצינוריות המלפיגיות, המעיים האחוריים והשחלות כדי להשאיר מאחור רק את המעי התיכון המנותח, אתר העיכול העיקרי בתוך הזבוב.

בפרוטוקול לדוגמה, אנו ננתח את המעיים של זבובים בוגרים צעירים ומבוגרים כדי לעבור ניתוח נוסף באמצעות מיון תאים מופעל פלואורסצנטי, או FACS.

- לפני תחילת הנתיחה, יש להרדים בקבוקון אחד של 40 זבובים עם פחמן דו חמצני על מצע זבוב סטנדרטי. לאחר מכן השתמשו בסכין גילוח כדי לערוף את ראשיהם של כל הזבובים והעבירו אותם לצלחת דיסקציה המצופה בג'ל אגרוז. יוצקים מספיק PBS קר בתוספת BSA לתוך צלחת כדי לכסות את agarose. הזבובים יצופו.

לאחר מכן, עבור כל חרק, בתורו, לתפוס בטן זבוב עם זוג אחד של מלקחיים, ואת בית החזה עם אחר. להפריד את בית החזה מן הבטן. המעיים יהיו גלויים, וסביר להניח שהיבול עדיין יהיה מחובר לבית החזה. תפוס את המעיים ומשוך אותו מבית החזה. לאחר מכן, לתפוס את היבול ולמשוך את המעיים מעט קדימה מן הבטן כדי לפתוח אותו.

לאחר מכן, השתמש באחד המלקחיים כדי לתפוס את הקצה האחורי של הבטן, והשני כדי לתפוס את קצה הקוטיקולה הפתוחה הקדמית. משכו את הקצה האחורי כדי לשבור את הקוטיקולה, והמשיכו למשוך אחורית בעדינות רבה, עד שכל המעי נשלף מחלל הבטן. הסירו את המעי הקדמי, הצינורות המלפיגיים, המעי האחורי והשחלות, והותירו את המעי האמצעי החשוף.

כאשר המעיים האמצעיים מבודדים, השתמשו בפיפט פסטר זכוכית כדי להעביר מעת לעת כמה מרקמות המעי בכל פעם לצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר המכיל PBS קר בתוספת BSA על קרח.