יצירת ממוספרות ראשוניות: טכניקה לקביעת עוצמת התא

תא גזע יחיד של סרטן השד מוליד מקבץ תאים הנקרא ממוספירה ראשונית. כדי להשיג אותם, תחילה תרבית קו תאי סרטן השד עד 70% עד 80% במפגש, כדי להבטיח שהתאים נמצאים בשלב הצמיחה שלהם. הוסיפו טריפסין-EDTA כדי לנתק תאים מהצלוחית, והוסיפו מדיום עם סרום כדי לעצור את פעולת הטריפסין.

עכשיו, קח את התאים בצינור ובצנטריפוגה כדי לקבל את גלולת התא. השהה מחדש את הגלולה בתווך הממוספירה ללא סרום והעבר את המתלה דרך מסנן כובע מסננת תאים, כדי לקבל תרחיף תא בודד. תרחיף זה מורכב מתאי גזע, תאי אב ותאים ממוינים המראים ביטויי חלבון שונים.

CD44 ו- CD24 הם חלבוני פני השטח של התא האופייניים לתאי גזע של סרטן השד. הם חיוביים עבור ביטוי CD44 ושליליים עבור CD24. בודד תאים מתרחיף התא באמצעות פלואורסצנטיות או מיון תאים מופעל מגנטי. לאחר מכן, קח aliquot ו ad trypan כתם כחול לתאים, וחשב את מספר התאים קיימא למיליליטר באמצעות שקופית hemocytometer כדי למצוא את צפיפות הזריעה.

לבסוף, זרעו את התאים בצלחת שש הדבקות נמוכה במיוחד, כך שהתאים יישארו מושהים. דוגרים על הצלחת במשך 5 עד 10 ימים מבלי להפריע לצלחת עד שהכדורים מגיעים לקוטר 40 מיקרון. בפרוטוקול הבא נייצר ממוספרות ראשוניות מקו תאים של סרטן השד.

- עבודה תחת מכסה מנוע סטרילי, להתחיל הליך זה עם MCF7 או MDA-MB-231 תאים כי הם 70% עד 80% confluent. שאפו את המדיום מהצלוחית. שטפו את התא