אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:22 דק׳ • April 30th, 2023
- כדי להתחיל, זרעו את תאי הלוקמיה האנושיים בתרבית טרייה שהוכנה ודגרו לתקופה הרצויה. לאחר הדגירה, יש להכתים כמות קטנה של תרחיף תאים זה בכחול טריפאן ולהעריך את כדאיות התא באמצעות שקופית מונה תאים TC20. תאים מתים הם חדירים ותופסים את הצבע הטעון שלילית, בעוד תאים בני קיימא הם בלתי חדירים.
לאחר מכן, להוסיף מתיל בטא cyclodextrin לבקבוק תרבית כדי לרוקן מספיק את הכולסטרול של התא, מה שהופך אותם רגישים אולטרסאונד. לדגור על התאים לתקופה הרצויה. מלאו את מערכת הסוניקציה התאית במים שעברו דה-יוניזציה ונטרלו אותם למשך מספר דקות כדי למנוע בועות ואקום. מעבירים את כמות התאים הרצויה בבקבוקון הנצנוץ ומחברים את הבקבוקון להתקן האחיזה של מערכת הסוניקציה של התא.
הניחו את מכשיר האחיזה על גבי הצופר וקבעו את הגובה הרצוי מראש הצופר. הגדר פולסים נדרשים למשך הזמן הרצוי כדי לסניק את התאים. הוסף כחול טריפאן לתרחיף התא ומקם אותו במונה התאים TC20 כדי לנתח את הכדאיות והנזק של התא. תאי לוקמיה המטופלים במתיל בטא ציקלודקסטרין, כאשר הם נחשפים לאולטרסאונד בתדר נמוך, מראים ליזה משמעותית של תאים.
בפרוטוקול הבא נחקור סוניקציה של תאים והערכת נזקים של תאי לוקמיה אנושיים.
- כדי להכין את התאים לסוניקציה, זרעו אותם תחילה ב 4 כפול 10 עד התאים הרביעי למיליליטר בבקבוק 25 ס"מ מרובע באמצעות מדיום טרי. לאחר קביעת מספר התאים ברי קיימא ע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים