אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:59 דק׳ • April 30th, 2023
- התחל עם תרחיף תאי לוקמיה המכיל את צפיפות התאים הרצויה. צנטריפוגה והשעיה מחדש של התאים במדיום תרבית המכיל סרום. הוספת סרום מקדמת צמיחת תאים מתמשכת ותאים נעים על פני שלבי מחזור התא השונים. לדלל את התאים ברומודוקסיורידין, או BrdU, תמיסת תיוג ולגדל אותם בתנאים פיזיולוגיים למשך הזמן הנדרש.
תאים בסינתזה או בשלב S קולטים BrdU - אנלוג תימידין - שמחליף את תימידין בתהליך שכפול הדנ"א. צנטריפוגה את התאים כדי להסיר עודפי BrdU ולהשהות מחדש את התאים במדיה מתאימה. מעבירים את התאים לצלחת באר מרובה. אפשרו לתאים לגדול בתנאים פיזיולוגיים לפרקי זמן שונים.
בפרקי זמן שונים, תאים מתקדמים דרך שארית שלבי S, G2, מיטוזה ו- G1 ונכנסים למחזור התא הבא, המאפשר הערכה של התפשטות התא. בצע צביעת נוגדנים כדי לתייג BrdU עם נוגדן פלואורוכרום ולמדוד את התפשטות התאים באמצעות ציטומטריית זרימה.
בתוך ציטומטר הזרימה, פלואורוכרומים סופגים את אנרגיית הלייזר והפלואורס. מספר התאים המתרבים נמצא בקורלציה ישירה לפלואורסצנטיות שנצפתה. בפרוטוקול לדוגמה, נדגים את תיוג הדופק של תאי לוקמיה לימפובלסטית חריפה.
- פרוטוקול זה משתמש בקו תאי לוקמיה לימפובלסטית חריפה, NALM6, אך ניתן להחיל אותו על כל קו תאים שאינו דבק. שמור על תאי NALM6 בצלוחיות תרבית T-75 בסל"ד מלא ב-37 מעלות צלזיוס ב-5% פחמן דו-חמצני באוויר. לאחר איסוף התאים וביצוע ספירת תאי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים