תרבית דו-ממדית של תאים לוקמיים עם BMSCs: שיטה להשגת תת-אוכלוסיות של תאים לוקמיים

- במערכת דו-ממדית של תרבית משותפת, סוגי תאים מרובים גדלים יחד בצלחות תרבית שטוחות. מערכת תרבית זו מאפשרת את המחקר של אינטראקציות תאים והתנהגות במבחנה. כדי לבסס תרבית תאים לוקמית משותפת עם תאי סטרומה של מח עצם, או BMSCs, הוסף תרחיף תאים לוקמי לתרבית חד-שכבתית דבקה של BMSCs. לדגור על הצלחת בתנאי תרבית מתאימים. שמרו על התרבות המשותפת על ידי החלפת 90% ממדיום התרבות בכל יום רביעי.

במהלך תרבית דו-ממדית זו, התאים הלוקמיים מתקשרים עם BMSCs ומתמקמים לאזורים שונים בתרבית, ויוצרים שלוש תת-אוכלוסיות. מיקרוסקופ ניגודיות פאזה מאפשר הבחנה חזותית בין שלוש תת-האוכלוסיות. הקבוצה הראשונה של תאים לוקמיים המופיעים צפים בחופשיות בתווך מסווגים כתאים מרחפים. הקבוצה השנייה של תאים לוקמיים שנצמדו לפני השטח של monolayer BMSC נראה בהיר מסווגים כמו תאים בהירים פאזה.

הקבוצה השלישית של תאים לוקמיים שנדדו מתחת לשכבה החד-שכבתית נראית עמומה ומסווגת כתאים עמומים פאזה. בפרוטוקול הבא, אנו מבצעים תרבית משותפת של לוקמיה לימפובלסטית חריפה, או כל התאים, עם תאי סטרומה של מח עצם אנושי.

- התחילו בזריעה של 5 עד 20 פעמים 10 עד לתאים הלוקמיים השישיים ב-10 מיליליטר של תווך תרבית ספציפי לגידול על צלחת של 100 מילימטר של 80% עד 90% תאי סטרומה או אוסטאובלסטים של מח עצם. כל יום רביעי, להטות את הצלחת הצידה ולשאוף את כל המדיום למעט 1 מיליליטר, תוך הקפדה לא להפריע לשכבת התא הדבק. לאחר מכן, הוסיפו בזהירות 9 מיליליטר של תרבית תאים לוקמית טרייה בטיפה בינונית לפינת הצלחת לאורך הצד כדי להבטיח הפרעה מינימלית של התאים הדבקים.

לאחר היום ה-12 של התרבית המשותפת, העבירו בעדינות את מדיום התרבית מעלה ומטה מעל הצלחת כ-5 עד 10 פעמים כדי לאסוף את התאים הלוקמיים הצפים, והעבירו את התאים לצינור חרוטי של 15 מיליליטר. לאחר מכן, זרעו מחדש את התאים על צלחת חדשה של 80% עד 90% תאי סטרומה או אוסטאובלסטים של מח עצם, כפי שהודגם זה עתה. ביום הרביעי ייווצרו שלוש תת-אוכלוסיות של תאים לוקמיים, כאשר תאי הלוקמיה המרחפים צפים בחופשיות בתווך, תאי הלוקמיה הבהירים נדבקו לפני השטח של חד-שכבת התא הדבק, ותאי הלוקמיה העמומים נדדו מתחת לחד-שכבתי.