קציר תת-אוכלוסיות לוקמי: שיטה להפרדה מרחבית של תת-אוכלוסיות תאים לוקמיים מתרבית משותפת דו-ממדית

- כאשר תאים לוקמיים מתורבתים יחד עם תאי סטרומה מזנכימליים, הם מתקשרים עם תאי סטרומה ויוצרים שלוש תת-אוכלוסיות. תאים מרחפים צפים בחופשיות, תאים בהירי פאזה הנצמדים לפני השטח של החד-שכבה המזנכימלית, ותאים עמומים בפאזה מתחת לחד-שכבה המזנכימלית. כדי להפריד כל תת-אוכלוסייה, קח צלחת תרבית רקמה עם חד-שכבה של תאי סטרומה מזנכימליים.

זרעים של תאים לוקמיים הנמצאים בתרבית ספציפית לגידול על גבי החד-שכבתי, ודוגרים על הצלחת למשך הזמן הרצוי. לאחר מכן, לאסוף תאים סרטניים בתרחיף על ידי pipeting התאים צפים בחופשיות לתוך צינור נפרד. כעת, הוסיפו את המדיה הטרייה לצלחת ולפיפטה במרץ כדי לעקור את תאי הגידול הבהירים ממשטח החד-שכבתי המזנכימלי.

לאסוף תאים אלה על ידי pipeting אותם בצינור נפרד. מוסיפים טריפסין לצלחת להסרת התאים המזנכימליים הדבקים. הוסף נסיוב בקר עוברי, או FBS, כדי לעצור את פעולת הטריפסין ולפרק את צברי התאים. כעת, אספו את התאים העמומים בצינור. צנטריפוגה את כל שלושת הצינורות המכילים תת-אוכלוסיות תאים שונות בנפרד והשהתה מחדש את הגלולה במדיה טרייה לניתוח נוסף. בפרוטוקול הבא, נבודד תאים לוקמיים מתרחיפים, בהירי פאזה ודלי פאזה מתרבית משותפת דו-ממדית.

- כדי לקצור את תת-אוכלוסיית הגידול המרחף, שאפו את התווך מצלחת התרבית המשותפת של התא הלוקמי והשתמשו באותו מדיום כדי לשטוף בעדינות את הצלחת פעם אחת. לאחר מכן, העבירו את תת-האוכלוסייה של תאי לוקמי מתרחפים לתוך צינור חרוטי של 15 מיליליטר. כדי לקצור את תת-אוכלוסיית הגידול הבהירה, הוסיפו 10 מיליליטר של מדיום טרי בחזרה לצלחת התרבית המשותפת

ולשטוף כחמש פעמים במרץ מספיק, כדי להסיר את התאים הלוקמיים הדבקים מבלי לעקור את חד-שכבתי התא הדבק. לאחר מכן, העבירו את תת-האוכלוסייה הבהירה לצינור חרוטי 15 מיליליטר משלה. כדי לקצור את תת-אוכלוסיית הגידול העמום פאזה, הסר את התווך הנותר עם PBS של מיליליטר אחד לשטוף ולנתק את התאים עם שלושה מיליליטר של טריפסין ב 37 מעלות צלזיוס.

לאחר חמש דקות, טפחו בעדינות על דפנות הצלחת כדי לעקור את התאים הדבקים, ולאחר מכן הוסיפו מיליליטר אחד של FBS כדי לעצור את התגובה האנזימטית. לאחר מכן, שטפו את הסרום שלוש עד חמש פעמים כדי לפרק את כל צברי התאים הגדולים ולהעביר את תת-האוכלוסייה הלא מטוהרת לצינור חרוטי חדש של 15 מיליליטר. לאחר שכל תת-האוכלוסיות נאספו, סובבו את התאים והשעו מחדש כל אחת מהכדוריות במיליליטר אחד של תווך שחומם מראש.