אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:25 דק׳ • April 30th, 2023
- בתאים לוקמיים, הדחיקה של מקרומולקולות, כגון כמה חלבונים מדכאי גידול בין הגרעין לציטופלסמה, אינה מווסתת. אי לוקליזציה של חלבונים אלה הופכת אותם ללא פעילים, וכתוצאה מכך צמיחה בלתי מבוקרת של תאים לוקמיים. אנו יכולים לקבוע את המיקום החריג של חלבונים כאלה על ידי יצירת החלק הציטופלזמי והגרעיני מתאים לוקמיים.
התחל על ידי לקיחת הנפח הרצוי של תאים לוקמיים בצינור microfuge וצנטריפוגה כדי pellet התא. השהה מחדש את הגלולה בחיץ ליזה היפוטוני ולאחר מכן הוסף את הריכוז הרצוי של חומר ניקוי. חיץ ליזה היפוטוני גורם לתאים להתנפח ולשבור את קרום הפלזמה, משאיר את קרום הגרעין שלם, ובכך מבודד שברים ציטופלזמיים. חומר הניקוי מסייע במיצוי חלבונים מאברונים ציטופלזמיים.
צנטריפוגות את תאי הליזה בתרחיף ומעבירים את הסופרנאטנט לצינור טרי. הסופרנאטנט מכיל את החלק הציטופלזמי של התא. כדי להכין את החלק הגרעיני, השהה מחדש את הגלולה הנותרת במאגר הליזיס המלא והוסף חומר ניקוי. צנטריפוגה ולאסוף את החלק הגרעיני הקיים בסופרנאטנט לתוך צינור מיקרופוגה. אחסן את השברים הציטופלזמיים והגרעיניים במינוס 80 מעלות צלזיוס לניתוח נוסף. בפרוטוקול הבא נדגים את יצירת השברים התת-תאיים מתאים לוקמיים.
לאחר השלמת הדגירה של הגירוי ו/או הטיפול התרופתי, מעבירים את התאים לצינורות מיקרופוגה של 1.5 מיליליטר המסומנים בנפרד ולגלולה על ידי צנטריפוגה בע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים