אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:39 דק׳ • April 30th, 2023
- בדיקת שטף חוץ-תאי מסייעת לחקור את חילוף החומרים בתאים על ידי מדידת שני מסלולי האנרגיה העיקריים - גליקוליזה ונשימה מיטוכונדריאלית. במהלך הגליקוליזה, התאים מעכלים גלוקוז ומפרישים לקטט לחלל החוץ תאי יחד עם פרוטונים, שנקבע על ידי מדידת קצב החמצה חוץ-תאי או ECAR. במהלך נשימה מיטוכונדריאלית, תאים מנצלים חמצן לייצור ATP, הנמדד על ידי קביעת קצב צריכת החמצן או OCR.
תאים סרטניים מפגינים ספיגת גלוקוז גבוהה כאשר הם משנים את קצב חילוף החומרים שלהם כדי להסתגל ולשמור על שגשוג תאים בלתי מבוקר. כדי לנתח את חילוף החומרים בתאים סרטניים, תחילה הרכיבו מיקרו-צלחת לניתוח שטף המכילה חד-שכבה של תאים סרטניים דבקים ומחסנית חיישן מיובשת. מעבירים את מכלול הצלחת למנתח שטף. בתוך האנלייזר, גשושיות החיישן יורדות כדי ליצור מיקרו-תא חולף. כדי למדוד שטף חוץ-תאי, יציאת ההזרקה מציגה תרכובות בדיקה לתוך המיקרו-צלחת בנקודות זמן קבועות מראש.
בהתבסס על חילוף החומרים בתאים, ריכוזי החמצן הזמין והפרוטונים המשתחררים בתא המיקרו משתנים. שני פלואורופורים המוטבעים בבסיס המחסנית חשים ומודדים בו זמנית את רמות החמצן והפרוטונים, דבר המעיד על נשימה מיטוכונדריאלית וגליקוליזה, בהתאמה. בפרוטוקול הבא נדגים בדיקת שטף חוץ-תאי למדידת הפעילות המטבולית של תאים לוקמיים ראשוניים.
- בינתיים, כדי להכין את הצלחות לניתוח שטף חוץ-תאי, הוסיפו 12.5 מיק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים