סקירה כללית
מאמר זה מציג פרוטוקול מפורט לבידוד מחית עצם טרייה ושלמה מהגפיים האחוריות של עכברים, במטרה לבצע ניתוח ציטומטריית מסה (mass cytometry) של תאים משוורת הנויטרופילים. השיטה נועדה להקל על חקירת פגמים במחית העצם הרלוונטיים להפרעות דם כגון לוקמיה.
מרכיבי מפתח של המחקר
תחום המדע
- המטולוגיה
- אימונולוגיה
- ביולוגיה של התא
רקע
- מח עצם הוא רקמה קריטית המכילה תאי גזע המטופואטיים האחראים על ייצור תאי דם.
- בידוד מח עצם מעצמות גדולות כמו ה-femur וה-tibia מניב מספרים גבוהים של תאים.
- ניתוח של מח עצם חיוני לחקר אוכלוסיות של תאי מערכת החיסון והפרעות בדם.
- ציטומטריה המונית (Mass cytometry) מאפשרת ניתוח רב-ממדי של אוכלוסיות תאים, כולל תאים משושלת הנויטרופילים.
מטרת המחקר
- מתן פרוטוקול הניתן לשחזור להוצאה של מחית עצם שלמה מגפיים אחוריים של עכברים.
- מתן אפשרות לניתוח באמצעות ציטומטריה המונית (mass cytometry) של תאים משורשת הנויטרופילים ממחית עצם שבודדה באופן טרי.
- תמיכה במחקר על פגמים במחית העצם הקשורים להפרעות בדם.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- הדרה של עכברי C57 black-6 בני 6–10 שבועות.
- עיקור של אזור הניתוח באמצעות 70% ethanol.
- ניתוח לחשיפה ובידוד של ה-tibia וה-femur מהגפיים האחוריות.
- הסרה של רקמת שריר כדי להגיע לעצמות.
- הנחת העצמות ב-PBS קר לשמירה על חיוניות התאים.
- הכנת מערכת של מבחנות מיקרו-צנטריפוגה דו-שכבתיות עם חור שנקדח במבחנה הפנימית.
- צנטריפוגציה לשליפת מח עצם אל תוך מבחנת האיסוף.
תוצאות עיקריות
- בידוד יעיל של מחית עצם מלאה מהפמור (ירך) ומהטיביה (שוק) של עכבר.
- מחית העצם המופקת מתאימה ליישומים המשכיים כגון ציטומטריה המונית (mass cytometry).
- הפרוטוקול שומר על תנאים פיזיולוגיים כדי להבטיח את שלמות התאים.
- מניב מספר תאים מספיק לניתוח של תאי שוורה נייטרופילית ותאים המטופויטיים אחרים.
מסקנות
- פרוטוקול זה מספק שיטה מהימנה לבידוד מחסן גרעינים שלם מגפיים אחוריים של עכבר.
- הגישה תומכת בהכנת דגימות באיכות גבוהה עבור ציטומטריית מסה ואנליזות קשורות.
- היא ישימה עבור מחקרים הבוחנים אוכלוסיות של תאי מערכת החיסון ותאי המטופואזה במצב בריאות ובמחלה.
איזה זן עכברים ואיזה גיל מומלצים לפרוטוקול זה?
הפרוטוקול משתמש בעכברי C57 black-6 בני 6–10 שבועות, הנפוצים לשימוש במחקרים אימונולוגיים והמטולוגיים.
מדוע נבחרים הפמור (עצם הירך) והטיביה (עצם השוק) לבידוד מחול לשחול?
עצמות גדולות אלו מספקות תנובה גבוהה של תאי מחית עצם, מה שהופך אותן לאידיאליות לאנליזות המשך כגון ציטומטריית מסה.
כיצד נשמרת הסטריליות במהלך הפרוצדורה?
את אזור הניתוח והעכבר מעקרים באמצעות 70% ethanol, ואת הפרוצדורה מבצעים על גבי פד ניתוחי סטרילי באמצעות מכשירים סטריליים.
מהי מטרת השימוש ב-PBS קר במהלך בידוד עצם?
PBS קר מסייע בשמירה על תנאים פיזיולוגיים ומשמר את חיוניות התאים במהלך תהליך הבידוד.
כיצד מחלצים מח עצם מהעצמות?
עצמות מוכנסות לשפופרת מיקרוצנטריפוגה עם חור בתחתיתה, המונחת בתוך שפופרת גדולה יותר, ומסובבות בצנטריפוגה כדי לדחף את מחול השומן החוצה לצורך איסוף.
לאילו יישומים המשכיים מתאים מח העצם שבודד?
מח העצם שנאסף מתאים לציטומטריה המונית (mass cytometry) ולניתוחים אחרים של אוכלוסיות תאי מערכת החיסון ותאי ההמטופואזה.
האם ניתן להתאים פרוטוקול זה לזנים אחרים של עכברים או לגילאים שונים?
בעוד שהפרוטוקול עבר אופטימיזציה עבור עכברי C57 black-6 בני 6–10 שבועות, ניתן להתאימו לגזעים או לגילאים אחרים באמצעות התאמות מתאימות.