אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:57 דק׳ • April 30th, 2023
- תאי T, קבוצה של לימפוציטים, ממלאים תפקיד פעיל במאבק בזיהום. יחד עם סוגים רבים אחרים של תאי דם, תאי T חיסוניים נמצאים בטחול העכבר ובבלוטות הלימפה. כדי לבודד באופן סלקטיבי תאי T, יש לקצור טחול מורין ובלוטות לימפה ולמקם אותם על מסננת תאים. לשטוף את הרקמה עם מדיה מתאימה כדי לקבל תרחיף תא בודד.
הוסף אשלגן אמוניום-כלורי, או חוצץ ACK, כדי ליזה את תאי הדם האדומים. צנטריפוגה להפרדת תאי הדם השלמים מהליזט. השליכו את הסופרנאטנט והשהו מחדש את התאים בחיץ מתאים. טפל בתרחיף עם תערובת של נוגדנים אנטי-עכבריים ביוטינילציה כדי להתמקד בתאי דם כמו גרנולוציטים, תאי B, תאי NK, וכל אריתרוציטים שנותרו. תאי T אינם ממוקדים ולכן נשארים לא מתויגים.
לאחר מכן, הוסיפו מיקרו-כדוריות מגנטיות נגד ביוטין לתרחיף. כל התאים המסומנים בביוטין נקשרים למיקרו-כדוריות. כאשר הם נשמרים תחת השפעת שדה מגנטי חזק, התאים המסומנים מגנטית נצמדים לדופן הצינור. תאי T לא מסומנים נשארים בהשעיה. אספו את תאי ה-T המועשרים הבלתי מאוגדים לתוך צינור איסוף טרי. בפרוטוקול הבא, אנו מראים את הבידוד של תאי T מטחול העכבר ומבלוטות הלימפה, תוך שימוש בטכניקת הפרדה מגנטית.
- אגרו את בלוטות הלימפה והטחול במסננת נקבוביות של 40 מיקרומטר והשתמשו בבוכנה מזרק כדי לאוורר את הרקמות דרך הפילטרים כדי לשחרר את התאים. שטפו את המסננת והבוכנה עם מדיום RPMI בתוספת FBS
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים