אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 6:29 דק׳ • April 30th, 2023
- Chromatin immunoprecipitation, או ChIP, היא טכניקה המשמשת לקביעת אינטראקציות חלבון-DNA בתאים. חלבונים נקשרים לאתרים ספציפיים בדנ"א ומווסתים את ביטוי הגנים. ראשית, לייצב את קומפלקס חלבון ה- DNA עם פורמלדהיד. פורמלדהיד מקשר חלבונים לרצף הדנ"א הקשור על ידי יצירת קשרים קוולנטיים.
לאחר מכן, השתמש במאגר ליזה מתאים כדי ליזה את התאים לשחרר כרומטין המכיל את קומפלקסי ה- DNA-חלבון הצולבים. צנטריפוגו את המתלה והפעילו את הסופרנאטנט כדי לקבל שברי כרומטין. לאחר מכן, תייגו את הדגימה בנוגדן מתאים שנקשר במיוחד לחלבון הקשור לדנ"א.
הוסף חרוזים מגנטיים מיוחדים לדגימה. החרוז מזהה את הנוגדן ונקשר אליו. השתמש מגנט כדי לאסוף את החרוזים המגנטיים עם קומפלקס נוגדן-חלבון-DNA. שטפו את הדגימה כדי להסיר כרומטין או נוגדנים לא מאוגדים. הוסיפו חיץ בריכוז מלח גבוה לקומפלקס ודגרו בטמפרטורות גבוהות יותר כדי להפוך את הקשרים הצולבים של חלבוני DNA.
בעזרת מגנט, אספו את הסופרנאטנט המכיל את הדנ"א והחלבונים. הוסף אנזים פרוטאינאז K כדי לפרק את החלבונים בדגימה. הוסף חיץ מתאים כדי לזרז DNA ולהשתמש בו לניתוח נוסף. הפרוטוקול הבא ידגים את המשקעים החיסוניים של הכרומטין בתאי לוקמיה לימפוציטית כרונית כדי לזהות גני מטרה של NFAT2.
- ראשית, הכינו 20 מיקרוליטר חרוזים מצופים חלבון A לכל משקעים בצינור אחד של 1.5 מיליליטר. הניחו לחרוזים לה
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים