אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:21 דק׳ • April 30th, 2023
- תאי גזע ותאי אב המטופויטיים או HSPC, יכולים לחדש את עצמם ולהתמיין לסוגים שונים של תאי דם. HSPCs צוברים בהדרגה מוטציות DNA במהלך החיים, אשר יכול לתרום לוקמיה. כדי לנתח מוטציות כאלה, HSPCs נוצרים בדרך כלל ממח העצם.
התחילו בהוספת נוגדנים מצומדים פלואורופורים לתאים חד-גרעיניים - תאי גזע בוגרים שבודדו ממח העצם - ודגרו עליהם למשך הזמן הרצוי. הנוגדנים נקשרים לסמנים ספציפיים של פני התא כגון CD34. כעת, טען את התערובת בציטומטריה התאית המופעלת על ידי פלואורסצנטיות או במכונת FACS.
נוגדנים מצומדים פלואורופור פלואורס כאשר נפגע על ידי הלייזר. טיפות תא בודדות עוברות דרך הגלאי המודד את עוצמת הפלואורסצנטיות, שעל בסיסה יש לטיפה מטען חשמלי. בנוכחות שדות אלקטרומגנטיים, תאים טעונים חיובית עוברים למיכל השלילי ולהיפך.
כעת, הגדל את HSPCs CD34 חיוביים ממוינים FACS במדיום מתאים למשך הזמן הרצוי עד שהשיבוטים גלויים. לאחר מכן, עקרו את השיבוטים על ידי פיפטינג נמרץ וצנטריפוגה כדי לגרש את התאים. אחסנו את הגלולה המכילה HSPCs משובטים בטמפרטורה של מינוס 20 מעלות צלזיוס לניתוח נוסף. בפרוטוקול הבא נייצר שיבוטים של HSPC מהתאים החד-גרעיניים.
- התחל הליך זה בהכנת חומר לדוגמה וצביעה כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן, להכין 25 מיליליטר של גזע hematopoietic ותא אב, או HSPC, מדיום תרבית. מלאו צלחת תרבית תאים של 384 בארות עם
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים