מיון תאים המופעלים על ידי מגנטית: שיטה לבידוד תאים חיוביים של C-Kit

- c-Kit, או CD117, הוא קולטן טרנסממברנה טירוזין קינאז המתבטא על ידי תאי גזע או תאי אב המטופויטיים הנמצאים במח העצם ובדם. זהו גם סמן לגילוי לוקמיה מיאלואידית חריפה.

כדי לבודד תאים חיוביים של c-Kit, קצרו עצמות רגליים של מורין ומעכו אותן כדי לשחרר את המח מבפנים. סנן את מתלה המח כדי להסיר שברי עצם. שכבות את התסנין המכיל תאי מח עצם על מדיום שיפוע צפיפות, וצנטריפוגה כדי להפריד תאים חד-גרעיניים משברים אחרים.

אספו את השכבה העכורה של תאים חד-גרעיניים בצינור המכיל מיקרו-חרוזים מצומדים לנוגדנים נגד CD117 בעכבר. יש לדגור על קומפלקסים של נוגדנים-חרוזים כדי להיקשר לקולטני CD117 בתאים חיוביים של c-Kit. מעבירים את המתלה המוגר דרך עמוד מגנטי הממוקם בשדה מגנטי. כל התאים החיוביים של c-Kit המסומנים במיקרו-כדוריות מגנטיות נשארים בעמודה, בעוד שהתאים שאינם מסומנים עוברים דרכם.

הסר את העמוד מהשדה המגנטי, ושטוף את התוכן באמצעות חיץ מתאים כדי לאלוט תאים חיוביים c-Kit. בפרוטוקול הבא נראה בידוד של תאים חיוביים של c-Kit ממח עצם של עכבר מהונדס.

- בתור התחלה, קצרו את עצמות הרגליים מעכבר שעבר המתת חסד. נקה את הרקמות מן העצמות עם אזמל. לאחר מכן, מניחים את העצמות ב- PBS קר על קרח ומועכים את העצמות עם מזיק. לאחר מכן, סנן את מתלה התא דרך מסננת תא 70 מיקרומטר לתוך צינור מכסה בורג 50 מיליליטר עם פיפטה 10 מיליליטר. שטפו