אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 4:59 דק׳ • April 30th, 2023
- רטרו-וירוסים הם נגיפי RNA המשתכפלים באמצעות שעתוק הפוך כדי להמיר את גנום ה-RNA שלהם ל-DNA דו-גדילי ולהשתלב לצמיתות בגנום המארח. חלקיקים נגיפיים חדשים יוצאים מהתא ויכולים להדביק תאים אחרים. טיפול גנטי בסרטן משתמש בווקטורים רטרו-ויראליים כדי להחדיר גנים טיפוליים לתאי מטרה באמצעות טכניקה הנקראת טרנסדוקציה כדי לווסת את הגן שעבר מוטציה או לחסל תאים.
כדי להשיג וקטורים רטרו-ויראליים בעלי טיטר גבוה, הדבק את תאי HEK 293 בתערובת טרנספקציה המכילה את הפלסמיד הרטרו-ויראלי הרצוי, פלסמיד אריזה וסוכן טרנספקציה מתאים. לדגור על התאים. סוכן transfecting מאפשר את המסירה של שני פלסמידים לתוך התאים.
הפלסמיד הרטרו-ויראלי מקודד את הגנום הנגיפי עם גן המטרה ואילו פלסמיד האריזה מקודד את חלבוני המעטפת הנגיפית. המנגנון התאי של תאי האריזה יוצר חלקיקים רטרו-ויראליים ומשחרר אותם למדיום. אספו את הסופרנאטנט הנגיפי והצנטריפוגה כדי להסיר תאים.
העבירו את הריכוז הרצוי של חלקיקים נגיפיים ותאים סרטניים לצלחת תרבית מצופה פיברונקטין כדי להקל על קשירת חלבוני מעטפת נגיפיים לתאים. לדגור על התאים. לאסוף את התאים ולבצע cytometry זרימה לנתח את יעילות התמורה. פרוטוקול זה יבצע התמרה בתיווך רטרו-ויראלי של תאי מח עצם עכבר חיוביים ל-c-Kit.
- ראשית, שלבו את ה-DNA של הפלסמיד הרטרו-ויראלי עם פלסמיד האריזה, סידן כלורי ומים בצינור של 1.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים