אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:31 דק׳ • April 30th, 2023
- לעיתים, תא גזע או תא אב עובר מוטציות, מה שיוצר תא גזע לוקמי. בתאים אלה, חלבונים מסוימים מווסתים, ושימוש בתרכובות אנטי-סרטניות כנגד חלבונים כאלה יכול לסייע בשליטה על גדילת התאים. ניתן לנתח את ההשפעה של תרכובות אנטי-סרטניות אלה באמצעות בדיקת CFU על ידי ניטור מספר וגודל המושבות שנוצרו.
התחילו בלקיחת תאי אב מעכבר לוקמי ודילולם בתרבית מתאימה. הוסיפו את תרחיף התאים הזה יחד עם התרכובת האנטי-סרטנית המתאימה למתילצלולוז המכיל ציטוקינים ספציפיים לעכבר, ומזגו אותו לצלחת פטרי. דוגרים על תערובת זו עד להופעת המושבות. מתילצלולוז היא מטריצה אינרטית מבחינה כימית, מוצקה למחצה, המונעת נדידת תאים, בעוד ציטוקינים מעוררים תאי אב להתמיין וליצור מושבות המכילות צאצאים מוכרים.
לאחר מכן, מכתימים את המושבות באמצעות יודוניטרוטטראזוליום כלוריד, או INT, ודגרים למשך הלילה עד שהמושבות הופכות לחום אדמדם כהה. אנזימים מיטוכונדריאליים מפחיתים INT בצבע צהוב לצבע פורמזן בצבע חום אדמדם. לבסוף, לזהות ולספור את המושבות הנוכחיות על הצלחת. בפרוטוקול הבא, נבצע בדיקת CFU כדי לבדוק את ההשפעה של תרכובות אנטי-סרטניות על תאים חיוביים ל-YFP.
- ראשית, הפשירו את המתילצלולוז עם ציטוקינים לעכברים בטמפרטורת החדר. ואז aliquot 3 מיליליטר של methylcellulose בצינור FACS. הוסף 100 מיקרוליטר של השעיית התא עם המעכבים המתאימים ל -3 מיליליטר מת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים