ברירה אימונומגנטית שלילית: שיטה לטיהור תאי B מתאים חד-גרעיניים היקפיים בדם
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 3:06 דק׳ • April 30th, 2023
תאי דם חד-גרעיניים היקפיים או PBMCs, כוללים תאי B, תאי T, תאי הרג טבעי או NK ומונוציטים. תאי B מייצרים מולקולות אימונוגלובולינים כדי להילחם בזיהום. בלוקמיה, תאים אלה מתרבים ושולחים גרורות לאיברים שונים.
כדי לבודד תאי B, התחילו עם השעיה של PBMCs מבודדים. הוסיפו תערובת נוגדנים ראשונית המכוונת כנגד מולקולות ספציפיות של פני התא הנקראות צביר התמיינות או CD. נוגדנים ספציפיים נקשרים למולקולת CD-3 על תאי T, למולקולת CD-14 על מונוציטים, ומולקולת CD-16 על תאי NK, ומשאירים את תאי B ללא תווית.
לאחר מכן, לשטוף את הדגימה כדי להסיר את נוגדנים לא קשורים. הוסף מיקרו-כדוריות מגנטיות מצומדות נוגדנים משניים לדגימה. נוגדנים משניים נקשרים לאזור FC של נוגדנים ראשוניים המחוברים לתאים ספציפיים. הניחו את הצינור המכיל את תרחיף התא המסומן תחת השפעת שדה מגנטי. בשדה, התאים המסומנים מגנטית נודדים ונקשרים לדופן הצינור, מה שמוביל לברירה שלילית של התאים הלא רצויים. אספו את הסופרנאטנט המכיל תאי B מועשרים לתוך צינור איסוף טרי.
בפרוטוקול זה נבצע סלקציה אימונומגנטית שלילית של תאי B לוקמיים מ-PBMCs של חולי לוקמיה לימפוציטית כרונית.
השליכו את הסופרנאטנט והשהו מחדש 10 מיליון PBMCs במיליליטר אחד של מאגר בידוד, שהוא PBS עם 0.1% BSA ו-2 מילימולר EDTA, כאשר ה-pH מותאם ל-7.4. לימפוציטים CLL עכשיו צריך להיות מטוהרים מן ההכנות P
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים