מטבוליזם פורין חוץ-תאי: בדיקה מבוססת HPLC למדידת ייצור אדנוזין ומטבוליזם בתאים לוקמיים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מחקר סרטן
0 צפיות • 5:01 דק׳ • April 30th, 2023
- אדנוזין, נוקלאוזיד פורין הנמצא בריכוזים נומינליים בחלל החוץ תאי, מסייע בבדיקת התפשטות תאים בתנאים פיזיולוגיים. במהלך מצבים פתולוגיים כמו לוקמיה, ריכוז האדנוזין החוץ תאי עולה ומעכב תגובות חיסוניות נגד תאים סרטניים. הצטברות אדנוזין נובעת מדפוספורילציה של נוקלאוטידים ATP או ADP, או עקב פירוק לקוי של אדנוזין לנוקלאוזיד אינוזין.
כדי למדוד ייצור אדנוזין וצריכתו, תרבית תאים סרטניים בנוכחות מצע נוקלאוטידים. הפעילות המטבולית של אדנוזין בתאים קובעת את ריכוזי מולקולות הפורין השונות הקיימות בתרבית. צנטריפוגה כדי להסיר את התאים ולקבל מולקולות purine ב supernatant.
כדי להפריד ולכמת פורינים, העבירו את הדגימה לבקבוקונים מתאימים. טען אותם לתוך פאזה הפוכה, כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים, או עמודת RP-HPLC, המכילה פאזה נייחת משותקת עם ליגנדות הידרופוביות. בזמן שהן עוברות דרך העמודה, מולקולות הידרופוביות נספגות לליגנדות ונשמרות על בסיס ההידרופוביות שלהן. המולקולות הכי פחות הידרופוביות זורמות החוצה ראשונות, בעוד שאנליטות הידרופוביות יותר זורמות אחרונות.
חקר מאפייני השיא לכל אנליט בכרומטוגרמה HPLC מסייע לזהות את ריכוזיהם בתוך הדגימה. בפרוטוקול זה, אנו משתמשים בטכניקת RP-HPLC כדי לכמת מטבוליזם פורין חוץ-תאי בתאי לוקמיה לימפוציטיים כרוניים.
- כדי לבדוק את צריכת AMP וייצור אדנוזין ואינוזין, יש להש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים