בדיקת אוכלוסיית צד: שיטה לבידוד אוכלוסיית צד של תאי גידול מדגי זברה

- טיפול כימותרפי בגידולים מכוון בדרך כלל לתאים בעלי שגשוג גבוה, ומשאיר מאחוריו תת-קבוצה קטנה של אוכלוסיית תאי הגזע, מה שמוביל לשחזור הגידול. תאי גזע אלה נקראים אוכלוסיית הצד. מאחר שלאוכלוסיית הצד חסרים סמני תאים ספציפיים, אנו משתמשים בבדיקת אפלוקס צבע כדי לבודד אותם מתאי גידול אחרים.

כדי להתחיל, להוסיף צבע Hoechst לתאי הגידול של דג הזברה המבודד. הוכסט נכנס לגרעין ונקשר לאזור העשיר ב-A-T בחריץ המינורי של הדנ"א. באוכלוסיית הצד של התאים יש ריכוז גבוה יותר של מובילי ABC על פני השטח, מה שמוביל לשטף מהיר של צבע מחוץ לתא, המציג פלואורסצנטיות נמוכה.

קח בקבוקון נוסף של תאי גידול שטופלו בהוסקט והוסף לו ורפאמיל. בקבוקון זה פועל כבקרה, כי verapamil חוסם את טרנספורטרים ABC גרימת ירידה אפלוקס hoechst, ולכן, הגדלת פלואורסצנטיות באוכלוסיית הצד.

לדגור הן על תאי הבקרה והן על תאי הדגימה בחושך. לאחר מכן, תאי כתמים נגדיים עם יודיד פרופידיום שנכנסים לגרעין של תאים מתים באופן בלעדי ומצטלבים בין בסיסי DNA, צובעים את התאים המתים באדום. לבסוף, מיין את התאים באמצעות ממיין תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות. בפרוטוקול הבא נבודד את אוכלוסיית הצד של תאי הגידול מדגי זברה.

- לפני צביעת התא, יש לדלל את צבע Hoechst במים נטולי נוקלאז לקבלת תמיסת עבודה של מיליגרם אחד למיליליטר. אחסנו את התמיסה המוכנה המכוסה ברדיד אלומי