Name: הקמת ראשיים פיברובלסטים תרבויות למבוגרים מאת מכרסמים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: למדו פרוטוקול לבידוד וגידול תרביות פיברובלסטים ראשוניים מרקמת עור וריאה של מכרסמים פראיים. השיטה משתמשת בקולגנאז לעיכול הרקמה ומייצרת כ-10 מיליון תאים מקטע של סנטימטר רבוע אחד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

אנו מודים ד&quot;ר סטיבן Austad למתן אותנו עם הגרסה הראשונה של פרוטוקול זה. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מ-NIH ו הרפואי אליסון קרן אל VG ו AS

1. לפני שמתחילים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר מספריים מלקחיים עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המקום stirrer מגנטי קטן בתוך כוס 30 מ"ל, מכסים עם שתי שכבות של נייר, ועל החיטוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן 28 יחידות וונש / mL מניות פתרון של Liberase Blendzyme 3 במים סטריליים. בצע 0.5 aliquots מ"ל ולהקפיא ב -20 ° C. הפשרה aliquot חדש לפני כל שימוש. הפתרון עשוי להופיע מעונן לאחר ההפשרה. וורטקס הפתרון עד שיתברר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחמם את תרבות התקשורת הסלולרי. </li></ol> 2. דוגמה חיה הכנה זהירות: חיות בר עלולים להכיל פתוגנים כגון וירוס הכלבת. תמיד להיות מודעים לפתוח החדים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדימו והמקום פגר ב 4 ° C. עדיף להשתמש פגר מיד, אולם אם הדבר אינו מעשי כגון אם בעלי החיים שנאספו בשטח, פגרי ניתן להשתמש תוך 24 שעות. לאחר 24 שעות התשואה יורדת התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנתחים את החיה בסוויטה כירורגית או במנדף כימי (לא מכסה המנוע בתרבית רקמה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אזור בית השחי הוא אתר נוח לאסוף דגימות עור כמו עור בבית השחי הוא רזה, מכיל פחות שומן, פרווה הוא פחות צפוף. נקו את האתר החתך עם אתנול 70%. ודא פרווה ספוגה אתנול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הפרווה סביב האתר חתך באזמל חד. לגלח שטח גדול יותר מאשר באתר החתך הרצוי. נסו לצמצם חתכים בעור. ריסוס באזור עם אתנול 70% ולתת לו להתייבש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי לאסוף דגימת עור בלו שבר כ 1 2 ס"מ. לצבוט את העור עם מלקחיים רקמות, לגזור במספריים. נסו לא לחתוך את שכבת השומן בעור, כמו שומן מפריעה לעיכול collagenase. כדי לאסוף את דגימות ריאה, לשטוף את אזור החזה עם 70% אתנול, ולפתוח את העור על החזה במספריים על ידי ביצוע חתך T-צורתו ומשך לגזרים את דשי של העור. לשטוף את האזור שריר פתחה עם אתנול 70% ולתת להתייבש. חותכים את החזה באמצעות מלקחיים סטריליות ומספריים (חותכי להשתמש עצם לבעלי חיים גדולים יותר). השתמש בטכניקות סטרילי כדי למנוע זיהום האיברים הפנימיים. אל תיגע באיברים פנימיים עם מכשירים נגע פרווה של בעלי חיים. גזור שברי הריאות של כ 1 ס"מ 2 באמצעות מלקחיים סטריליות ומספריים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רקמה שברי מקום 50 צינורות מ"ל עם PBS סטרילי כדי למנוע התייבשות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף החיצוני של 50 מ"ל עם שברי צינורות רקמה עם אתנול, ולקחת אותם אל מכסה המנוע בתרבית רקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כראוי תשליך הפגר החי. </li></ol> 3. מחלץ תאים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את שברי רקמה לתוך צלחת 10 ס"מ תרבות רקמות באמצעות אזמל סטרילי. אין להעביר PBS יותר מדי עם המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הרקמה אל ~ 1 מ"מ חלקים באמצעות שני ניתוחים. שימוש שני להבים באמצעות פעולה מספריים החל ממרכז ומושך מזה. שמור את הרקמה כידר, לא לחתוך חתיכה אחר חתיכה. כאשר חותכים את העור די דומה מרק, זה לא יהיה להפריד לחתיכות אבל יהיה למתוח דק. רקמת הריאה קל לחתוך, וזה יהיה להפריד לחתיכות קטנות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות אזמל, העברת רקמות וחותכים כוס 30 מ"ל סטרילי עם בר ומערבבים סטרילית. לשטוף את הצלחת המשמש לחיתוך רקמות עם 10 מ"ל של DMEM/F12 התקשורת עם 0.14 יחידות וונש / mL Liberase Blendzyme 3, 1X אנטיביוטי / antimycotic, ולהוסיף הפתרון כוס 30 מ"ל עם שברי הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסים את הכוס בנייר כסף סטרילי, דגירה על 37 מעלות צלזיוס, תוך בחישה לאט לאט, במשך 30 עד 90 דקות. משך הדגירה תלוי בסוג מינים הרקמה. הקפד לא מעל לעכל את הרקמה. Best התשואות מתקבלים כאשר שברי הרקמה עדיין קיימות בסוף העיכול. העור לוקח זמן רב יותר לעיכול מאשר הריאה. העור מפני בעלי חיים גדולים לוקח יותר זמן לעכל. בדוק את מערכת העיכול לאחר 30 דקות, ולאחר מכן כל 10 דקות. כאשר העור והעיכול יושלם, התקשורת הופכת להיות מעונן ושברי העור נפרדים זה מזה, ואת הקצוות של החלקים להיות "מעורפל". עיכול ריאות יש להפסיק כאשר שברי ריאות לשנות צבע אדום לבן ולהתחיל להרכיב סיבים דביק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפתרון Pipet המכיל שברי הרקמה הלוך ושוב כדי לשבור את הגושים. העברת הפתרון שפופרת 50 מ"ל סטרילי. אם השברים לעבור בקלות דרך קיצוץ 10 מ"ל פיפטה והעיכול נעשה היטב. שוטפים את כוס 3 פעמים עם 10 מ"ל של DMEM/F12 מדיה חם עם 15% FBS, 1X אנטיביוטי / antimycotic ולהוסיף את התקשורת הצינור 50 מ"ל עם שברי הרקמה. סגור את שפופרת 50 מ"ל ומערבבים על ידי היפוך כמה פעמים. FBS בתקשורת יפסיק Liberase העיכול. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין ב 524 גרם של צנטריפוגה מתנדנד רקמה תרבות דלי דקות 5. הסר את supernatant. Resuspend את הכדור ב 10 מ"ל של DMEM/F12 מדיה חם עם 15% FBS, 1X אנטיביוטי / antimycotic. Pipet ההשעיה עםכוח מרבי לשבור את פיסות רקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף עוד 30 מ"ל של DMEM/F12 התקשורת עם 15% FBS, 1X אנטיביוטי / antimycotic, מערבבים צנטריפוגות ב 524 גרם של צנטריפוגה מתנדנד רקמה תרבות דלי דקות 5. חזור פעם נוספת כדי להסיר את עקבות Liberase. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend את הכדור ב 10 מ"ל של DMEM/F12 התקשורת עם FBS 15%, 1X אנטיביוטי / antimycotic והעברה צלחת 10 ס"מ רקמה תרבות ומניחים תרבות רקמות החממה ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2, 3% O 2 . </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את צלחות כל יום במשך fibroblasts וצבע התקשורת. אם הבידוד היה מוצלח, fibroblasts לזחול מתוך שברי רקמות לצרף צלחת (איור 1). פיברובלסטים מתחילים לצאת שברי הרקמה תוך 2-5 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אם צבע השינויים התקשורת צהובה, זה מצביע על אפשרות של זיהום או הצפיפות של תאים. בדוק את הצלחות מתחת למיקרוסקופ בהגדלה גבוהה. אם חיידקים, פטריות, או תולעים נמצאים להשליך את הלוחות (זה רק לעתים נדירות בעיה עם חיות מעבדה, אך עלולה להתרחש כאשר הדגימות שנאספו בטבע). אם הזיהום לא קיים, אבל התקשורת שינה את צבעו, זו נגרמת על ידי או יותר מדי תאים או רקמות שברים רבים מדי להציב צלחת זהה. אם יותר מ 60% של צלחת מכוסה על ידי fibroblasts המצורף, לשנות את התקשורת על הצלחת ולהעביר את שברי רקמות צלחת חדשה עם המדיה החדשה. אם לא fibroblasts רבים מחוברים לצלחת, לשנות את התקשורת לפצל את פיסות הרקמה ל 2-4 צלחות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 7 ימים, אם התקשורת לא שונו קודם לכן, לשנות את התקשורת ולהעביר את שברי רקמות צלחת חדשה עם המדיה החדשה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דגירה ושברי תאים ורקמות עבור 7 ימים נוספים. ביום 14 כל fibroblasts קיימא יש יצאו שברי הרקמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר 14 ימים מתחילת בידוד התא, להשליך את התקשורת הישנה ושברי רקמות, לקצור את התאים צלחת אותם על צלחת חדשה 5x10 5 תאים / EMEM צלחת עם FBS 15%, 1X פניצילין / סטרפטומיצין, ללא חומצות האמינו החיוניות , נתרן pyruvate. התקשורת EMEM יתמכו בצמיחה של fibroblasts סוגי תאים בלבד ושאר ימות או להפסיק מתרבים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהתאים מגיעים מפגש 80-90%, להקפיא aliquot של תאים לשימוש עתידי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המשך culturing התאים על ידי פיצול אותם 5x10 5 תאים / צלחת כאשר התאים מגיעים מפגש 80-90%. </li></ol> 4. נציג תוצאות Fibroblasts רגיל הם תאים גדולים עם בליטות בולט (lamellipodia) (איור 2). Fibroblasts לגדול בשכבה. תרבות גדל בריא מכיל תאים 1-10% בשלב M, מוכר מעוגל למעלה כמו תאים מוגבה מעל פני השטח של הצלחת, אך לא מנותקת מן הצלחת (איור 3). בדרך כלל, צלחת 10 ס"מ seeded עם 5 תאים 5x10 הופך ומחוברות בימים 3-4. זמן ההכפלה משתנה מאוד בין המינים, והיא עלולה להיות גדולה יותר עבור כמה מינים חיים ארוכים מכרסם 1. כאשר תאים למלא צלחת עוצרים התפשטות בשלב G1. צלחת ומחוברות אופיינית של fibroblasts מכיל שכבה של תאים צפופים (איור 4). כאשר התאים מגיעים מפגש 90% הם מוכנים פיצול. אם תרצה, התאים יכול להישמר על צלחת ומחוברות נעצר לפרקי זמן קבוע עם שינויים המדיה (פעם או פעמיים בשבוע). <img src="/files/ftp_upload/2033/2033fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. בידוד פיברובלסטים מהעור העכבר (א) ו - ריאה (B). התקשורת שונתה כדי להסיר תאים פנויים ופסולת לפני לקיחת תמונות ביום 7. <img src="/files/ftp_upload/2033/2033fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> איור 2. ריאה עכבר fibroblasts. <img src="/files/ftp_upload/2033/2033fig3.jpg" alt="איור 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 3"> איור 3. שדה של fibroblasts העכבר המכיל תאים בשלב-M, צילם בהגדלה של 10X. <img src="/files/ftp_upload/2033/2033fig4.jpg" alt="איור 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 4"> איור 4. צלחת ומחוברות של fibroblasts העכבר, צילם בהגדלה של 10X.

<ol><li>Seluanov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+tumor+suppressor+mechanisms+evolve+in+rodent+species+that+differ+in+size+and+lifespan.+Aging+%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Distinct tumor suppressor mechanisms evolve in rodent species that differ in size and lifespan. Aging .</a> Cell. 7, 813-823 (2008).</li>
<li>Parrinello, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+sensitivity+severely+limits+the+replicative+lifespan+of+murine+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Oxygen sensitivity severely limits the replicative lifespan of murine fibroblasts.</a> Nat Cell Biol. 5, 741-747 (2003).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Fibroblasts העיקרי רגיל לספק חלופה מצוינת הוקמה שורות תאים סרטניים מחקר ביולוגי. יתרון חשוב של fibroblasts היא שהם אינם נושאים מוטציות אונקוגנים ו מדכאי הגידול במחזור לשמור על שלמות התא מחסומים. זה עושה fibroblasts נורמלי מערכת המועדפת עבור המחקרים של ויסות מחזור התא, תיקון DNA, אפופטוזיס. פרוטוקול המתואר כאן מציע מתכון פשוט עבור בידוד ותחזוקה של fibroblasts העיקרי. פרוטוקול זה שימש בהצלחה לבודד fibroblasts מעל 20 מינים של מכרסמים. <p class="jove_content" style=";text-align:ri...

<table><tbody><tr><td>מצע DMEM/F12</td><td>Invitrogen</td><td>11330-032</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עובר (FBS), Qualified</td><td>Invitrogen</td><td>01437-036</td><td>הסרום מסוג Qualified נבדק מראש כדי לספק תמיכה טובה בצמיחה של פיברובלסטים ראשוניים.</td></tr><tr><td>אנטיביוטיקה/אנטימיקוטיקה</td><td>Invitrogen</td><td>15420-096</td><td></td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומייצין</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Liberase TM Research Grade&lt;/strong&gt;</td><td>Roche</td><td>&lt;strong&gt;05401127001&lt;/strong&gt;</td><td>אנזים חלופי.</td></tr><tr><td colspan="4">הערה מהמחברים: מאחר ש-Roche הפסיקה את ייצור ה-Liberase Blendzyme 3 (11814184001), הם ממליצים להשתמש במקום זאת ב-Liberase TM Research Grade medium Thermolysin (מס' קטלוג 05401119001 - 10 mg, מס' קטלוג 05401127001 - 100mg). עברנו להשתמש באנזים זה בהצלחה וללא בעיות.</td></tr><tr><td>מצע EMEM</td><td>ATCC</td><td>30-203</td><td>מצע ה-EMEM מ-ATCC מכיל כבר חומצות אמינו שאינן חיוניות ונתרן פירובט.</td></tr><tr><td>סכין מנתחים סטרילית, חד-פעמית, דגם Feathered #21</td><td>ספקים מרובים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אינקובטור עם בקרת שלושה גזים</td><td>Forma או Heraeus</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הקמת ראשיים פיברובלסטים תרבויות למבוגרים מאת מכרסמים

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

החשיבות של שימוש תאים ראשוניים, במקום שורות תאים סרטניים, ללימודים ביולוגיים הופך להכרה רחבה. תאים ראשוניים הם העדיפו במחקרים אפופטוזיס של מחזור התא, שליטה, תיקון דנ&quot;א, כמו תאים סרטניים לשאת מוטציות בגנים המעורבים בתהליכים אלה. תאים ראשוניים לא יכול להיות מתורבת ללא הגבלת זמן, בשל תחילת ההזדקנות replicative או aneuploidization. לפיכך, תרבויות חדשות צריכים להיות הוקמה על בסיס קבוע. ההליך עבור בידוד של fibroblasts מכרסם עובריים היא מבוססת היטב, אבל בידוד תרבויות פיברובלסטים מבוגרים לעתים קרובות אתגר. Fibroblasts מכרסם למבוגרים מבודדים מודלים העכבר של מחלות אנושיות יכולה להיות מלאה המועדפת כאשר משווים אותם fibroblasts מחולים האדם. יתר על כן, fibroblasts מבוגר הם חומר זמין רק כאשר עובדים עם מכרסמים בר שבו נשים בהריון לא ניתן להשיג בקלות. כאן אנו מספקים פרוטוקול לבידוד והתרבות של fibroblasts מבוגר מהעור מכרסם והריאות. השתמשנו בהצלחה הליך זה לבודד fibroblasts מתוך למעלה מעשרים מינים מכרסם מעכברים וחולדות מעבדה כדי מכרסמים בר כגון בונה, קיפוד, והסנאי.

מאמר זה מתאר פרוטוקול עבור בידוד ותחזוקה של תרבויות פיברובלסטים העיקרי של העור, רקמת הריאות של מכרסמים בר.

החשיבות של שימוש בתאים ראשוניים, במקום בשורות תאי סרטן, למחקרים ביולוגיים הולכת ומקבלת הכרה רחבה. תאים ראשוניים מועדפים...

בידוד פיברובלסטים חיים מעור ומרקמת ריאה של בעלי חיים מתחיל בהוצאה של פרגמנטים של עור וריאה מגופת בעל חיים. תוך שימוש בטכניקה סטרילית, הרקמה נחתכת לפרגמנטים קטנים ומעובדת באמצעות collagenase. פרגמנטים אלו של רקמה מעובדת מדגרימים לאחר מכן במצע גידול עשיר עד שהפיברובלסטים יוצאים מהרקמה.לבסוף, פיסות הרקמה מוסרות והמצע העשיר מוחלף במצע גידול לפיברובלסטים. לאחר פיצול התאים, מוקפאות מנות של תאים לשימוש עתידי. בסופו של דבר, פיסת רקמה של עור או ריאה בשטח של סנטימטר רבוע אחת מניבה עד למעבר 10⁷ של פיברובלסטים.והיתרון העיקרי של טכניקה זו על פני שיטות אחרות שאינן כוללות עיכול אנזימטי של רקמה הוא שהיא מניבה מספר רב של תאים ממגוון דגימות בעלי חיים. שיטה זו תסייע לחוקרים בתחום הביולוגיה השוואית לבודד ביעילות תאי דם ממגוון רחב של מיני יונקים. הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן שלבי עיכול הרקמה והקיצוץ קשים ללמידה מכיוון שהם אינטואיטיביים ומשתנים בהתאם לרקמה ולדגימת בעל החיים שבהם משתמשים. לפני תחילת הליך זה, יש לעקר מספריים ופינצטה ב-70% ethanol באוטוקלאב, להכין כלי בקר של 30 milliliter עם בוחש מגנטי קטן בתוכו, ולהפשיר אליקוויט חדש של תמיסת liase Zyme three.חממו גם את מצע גידול התאים. בעבודה עם בעלי חיים ברים, זכרו כי הם עשויים לשאת פתוגנים כגון נגיף הכלבת. עבדו בזהירות והיו מודעים תמיד לנוכחו

establishing-primary-adult-fibroblast-cultures-from-rodents

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

במאמר זה תיארנו את הדרך טיפוסי לבודד תרבות עכברוש מבוגר myocytes לב. Collagenase ו פרוטאז משמשים לעכל לבודד myocytes יחיד. Myocytes תרבותי לעקוב בפרוטוקול זה לעמוד בדרישות הניסוי ביותר.

תרבות ראשונית של הלב Myocytes למבוגרים עכברוש

כוחות מכניים לשחק תפקיד מפתח בהתפתחות הריאות ופגיעה ריאות. כאן אנו מתארים שיטה לבודד העובר מכרסמים ריאה מסוג תאים השנייה אפיתל fibroblasts ולחשוף אותם באמצעות גירוי...

מערכת ניסיונית ללמוד Mechanotransduction ב לתאי ריאה עוברית

סרטון זה מתאר את השיטה המהירה לבודד ולגדל את המלנוציטים והפיברובלסטים בו זמנית מעורו של גור העכבר לאחר הלידה. תאים אלה יכולים להישמר ולתפעל במבחנה כדי לחקור ביולוגיה של תאי העור, ריפוי פצעים ומלנומה.

גידול מהיר של מלנוציטים ופיברובלסטים ראשוניים של מורין: בידוד מלנוציטים ופיברובלסטים מדגימת עור מורין שלם

אנו מדווחים על שיטה לבודד מבשר עור נגזרות נאיביים multipotent (SKP) תאים פיברובלסטים מתרבויות האנושיות העיקריות. אנו מראים כי SKPs אלה נגזרים מתרבויות פיברובלסטים חולקים מאפיינים של תאי גזע דומים לאלה שנגזרים ישירות מביופסיות עור אדם. תאים אלה מבטאים את סמן הרכס העצבי, nestin, בנוסף לסמני multipotent כגון Oct4 וNanog.

בידוד תאי גזע בוגרים נאיבי מתרבויות פיברובלסטים אנושיות הראשוניות

אנו מציגים פרוטוקול ליצירת תרביות ראשוניות של תאי סטרומה בוושט עכבריים ואנושיים עם פנוטיפ מיופיברובלסטים. לתאים מתורבתים יש מורפולוגיה בצורת ציר, מבטאים α-SMA ווימנטין, וחסרים סמני פני תא אפיתל, המטופויאטי ואנדותל. ניתן להשתמש בתאי סטרומה מאופיינים במחקרים פונקציונליים של אינטראקציות אפיתל-סטרומליות.

בידוד של myofibroblasts מעכבר והוושט אדם

דור של תאי גזע pluripotent מושרה מספק סיכויים מרתקים לגזירה של השתלות אוטולוגית. עם זאת, ההתקדמות במדינת pluripotent מחדש בידול מייגע עדיין מעכבת תרגום קליני. כאן אנו מתארים את הגזירה של fibroblasts אדם הבוגר וההמרה הישירה שלהם לתאים עצביים מושרה ובידול שלאחר מכן לשושלות עצביות.

גזירה של fibroblasts אדם הבוגר וההמרה ישירה שלהם לתאים להרחבה עצבי אב

התנהגות פיברובלסטים עומדת בבסיס ספקטרום של ישויות קליניות, אך הן נשארות מאופיינות בצורה גרועה, בעיקר בשל ההטרוגניות הטבועה בהן. מחקר פיברובלסטים מסורתי מסתמך על מניפולציה במבחנה, המסווה התנהגות פיברובלסטים in vivo. אנו מתארים פרוטוקול מבוסס FACS לבידוד פיברובלסטים של עור עכבר שאינו דורש תרבית תאים.

עכברי Dermal פיברובלסטים בידוד על ידי FACS

אנו מתארים הליך ניסוי פשוט ומהיר ליצירת fibroblasts העיקרי מהאוזניים והזנבות של עכברים. ההליך אינו דורש הכשרה מיוחדת ובעלי חיים יכול לשמש לדור של תרבויות פיברובלסטים מאוזניים מאוחסנות על RT עד 10 ימים.

תרבויות יצירה ראשיות פיברובלסטים מרקמות אוזן וזנב עכבר

כאן אנו מציגים שלנו פרוטוקול עבור הפקת המושרה אבות erythroid (iEPs) מן העכבר fibroblasts למבוגרים באמצעות מונחי-פקטור שעתוק ישיר לשושלת התכנות (DLR).

ישיר לשושלת התכנות של העכבר למבוגרים פיברובלסט Erythroid אבות

פרוטוקול זה מתאר שיטה מהירה לייצר בו תרבויות מלנוציט ופיברובלסט מן העור של 0-4 העכברים הישנים של היום. התרבויות העיקריות הללו ניתן לשמור ומניפולציות בתוך מבחנה כדי ללמוד מגוון של תהליכים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית, כולל ביולוגיה של תאי העור, פיגמנטציה, ריפוי פצעים ומלנומה.

הדור המהיר של משפחת מלנוציט הראשית והתרבויות בפיברובלסט

אנו מציגים פרוטוקול כדי לבודד את הפיברוטים הראשוניים העיקריים באופן קל, מהיר ואמין, performable על ידי למתחילים (למשל, סטודנטים). הליך זה משלב את העיכול ברקמה אנזימטית ועצבנות מכנית עם גלי אולטרה סאונד כדי להשיג פיברוהטיות ראשונית. ניתן להתאים את הפרוטוקול בקלות לדרישות נסיוניות ספציפיות (לדוגמה, רקמת אדם).

אולטרה סאונד-מוגבר למבוגרים בידוד פיברוהפיצוץ

למדו פרוטוקול לבידוד וגידול תרביות פיברובלסטים ראשוניים מרקמת עור וריאה של מכרסמים פראיים. השיטה משתמשת בקולגנאז לעיכול הרקמה ומייצרת כ-10 מיליון תאים מקטע של סנטימטר רבוע אחד.

הקמת ראשיים פיברובלסטים תרבויות למבוגרים מאת מכרסמים

גלה סרטונים נוספים