Name: הקלטה התנהגות תאיים ב Myxococcus xanthus Biofilms באמצעות זמן לשגות Microcinematography (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-06T17:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 59 s
Description: למדו צילום מיקרו-קולנועי בזמן אמת לחקירת התנהגות נחיל בקטריות Myxococcus xanthus. השיטה משתמשת בחומרים זולים וניתנים לשימוש חוזר לתוצאות מדידות וברות-השוואה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה התאפשר הודות פרס קרן המדע הלאומית קריירה (MCB-0746066, אפיון activators תעתיק המווסתים התנהגות מתהוות) כדי RDW אנו מודים LJ Shimkus, BS גולדמן, ג&#39;סואן, מ &#39;זינגר, LG וולש, KA מרפי, HG טיילור לדיונים הערות מועילות על כתב היד.

<ol><li>Taylor, R. G., Welch, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemotaxis+as+an+emergent+property+of+a+swarm%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Chemotaxis as an emergent property of a swarm.</a> J Bacteriol. 190, 6811-6816 (2008).</li>
<li>Curtis, P. D., Taylor, R. G., Welch, R. D., Shimkets, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+Organization+of+Myxococcus+xanthus+During+Fruiting+Body+Formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Spatial Organization of Myxococcus xanthus During Fruiting Body Formation.</a> J Bacteriol. 189, 9126-9130 (2007).</li>
<li>Mignot, T., Merlie, J. P., Zusman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulated+pole-to-pole+oscillations+of+a+bacterial+gliding+motility+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Regulated pole-to-pole oscillations of a bacterial gliding motility protein.</a> Science. 310, 855-857 (2005).</li>
<li>Stoodley, P., Hall-Stoodley, L., Lappin-Scott, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detachment+surface+migration%2C+and+other+dynamic+behavior+in+bacterial+biofilms+revealed+by+digital+time-lapse+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Detachment surface migration, and other dynamic behavior in bacterial biofilms revealed by digital time-lapse imaging.</a> Methods Enzymol. 337, 306-319 (2001).</li>
<li>O'Toole, G., Kaplan, H. B., Kolter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+formation+as+microbial+development%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Biofilm formation as microbial development.</a> Annu Rev Microbiol. 54, 49-79 (2000).</li>
<li>O'Toole, G. A., Kolter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flagellar+and+twitching+motility+are+necessary+for+Pseudomonas+aeruginosa+biofilm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Flagellar and twitching motility are necessary for Pseudomonas aeruginosa biofilm development.</a> Mol Microbiol. 30, 295-304 (1998).</li>
<li>Dalton, H. M., Poulsen, L. K., Halasz, P., Angles, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substratum-induced+morphological+changes+in+a+marine+bacterium+and+their+relevance+to+biofilm+structure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Substratum-induced morphological changes in a marine bacterium and their relevance to biofilm structure.</a> J Bacteriol. 176, 6900-6906 (1994).</li>
<li>Dworkin, M., Eide, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myxococcus+xanthus+does+not+respond+chemotactically+to+moderate+concentration+gradients%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Myxococcus xanthus does not respond chemotactically to moderate concentration gradients.</a> J Bacteriol. 154, 437-442 (1983).</li>
<li>Dworkin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tactic+behavior+of+Myxococcus+xanthus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Tactic behavior of Myxococcus xanthus.</a> J Bacteriol. 154, 452-459 (1983).</li>
<li>Wu, S. S., Kaiser, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+expression+of+the+pilA+gene+in+Myxococcus+xanthus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Regulation of expression of the pilA gene in Myxococcus xanthus.</a> J Bacteriol. 179, 7748-7758 (1997).</li>
<li>Bustamante, V. H., Martínez-Flores, I., Vlamakis, H. C., Zusman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+Frz+signal+transduction+system+of+Myxococcus+xanthus+shows+the+importance+of+the+conserved+C-terminal+region+of+the+cytoplasmic+chemoreceptor+FrzCD+in+sensing+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Analysis of the Frz signal transduction system of Myxococcus xanthus shows the importance of the conserved C-terminal region of the cytoplasmic chemoreceptor FrzCD in sensing signals.</a> Mol Microbiol. 53, 1501-1513 (2004).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

זמן לשגות microcinematography (TM) הפכה הגישה הסטנדרטית ללימוד תנועתיות פרוקריוטים 2-7. באופן מסורתי, TM מבוצעת באמצעות פתילות נייר פילטר, רפידות אגר דקה, או לוחות אגר כמו מצעים 8-11. שיטות אלה נאותה וחסכונית כאשר נעשה שימוש כדי ליצור רצפים התמונה איורים הכללי של תנועת חיידקים. עם זאת, אם התמונה sequences חייב לגרום לדור של לשחזור נתונים קפדני כמותית, שיטות אלו זמן רב ולא אמינה למדי. לדוגמה, שינויים בשיטות אלה שנגרמו על ידי טעות אנוש עלול להוביל למגוון רחב של...

<table><tbody><tr><td>1.0% Casitone</td><td>Difco Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0.5% תמצית שמרים</td><td>Difco Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פיפטה לדגימה זעירה</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>טיפ זכוכית חד-פעמי בנפח 100 &amp;mu;l</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אטם גומי סיליקון בעובי 0.5-mm ובמידות 2 x 2 cm</td><td>Grace Bio-Lab Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הקלטה התנהגות תאיים ב myxococcus xanthus biofilms באמצעות זמן לשגות microcinematography

Recording Multicellular Behavior in Myxococcus xanthus Biofilms using Time-lapse Microcinematography

נחיל של δ-proteobacterium Myxococcus xanthus מכיל מיליוני תאים לפעול כתנועה, תיאום הקולקטיבי באמצעות סדרה של אותות כדי ליצור מורכבות, דפוסי דינמי כתגובה לאותות סביבתיים. דפוסים אלה מארגנים עצמית ו מתהווה, הם לא ניתן לחזות על ידי התבוננות בהתנהגות של תאים בודדים. באמצעות זמן לשגות מעקב assay microcinematography, זיהינו דפוס מתהווה נפרדות מ xanthus בשם chemotaxis, כהגדרתו התנועה מכוונת של נחיל את שיפוע מזין כלפי מקורו 1. כדי לאפיין ביעילות chemotaxis דרך microcinematography זמן לשגות, פיתחנו מורכב מאוד לשינוי צלחת (איור 1) ונבנה מקבץ של 8 מיקרוסקופים (איור 2), שכל אחד מהם מסוגל זמן לשגות לכידת וידאו. Assay הוא קפדני מספיק כדי לאפשר שכפול עקבי של נתונים מדידים, ואת קטעי וידאו וכתוצאה מכך מאפשרים לנו להתבונן ולעקוב אחר שינויים עדינים התנהגות נחיל. לאחר שנתפסו, קטעי וידאו המועברים למחשב ניתוח / אחסון עם מספיק זיכרון כדי תהליך ולאחסן אלפי קטעי וידאו. הגמישות של התקנה הזאת הוכיחה שימושי כמה מחברי מ xanthus הקהילה.

כדי ללמוד<em&gt; Myxococcus xanthus</em&gt; התנהגות הנחיל, עיצבנו פרוטוקול זמן לשגות microcinematography כי יכול להיות שונה עבור מבחני שונות. היא מעסיקה תנאי גידול סטנדרטיים המותאמים עבור מיקרוסקופיה, ו מניבה תוצאות לשחזור על ידי שימוש, אטמי סיליקון זול לשימוש חוזר. השתמשנו בשיטה זו כדי לכמת chemotaxis תאיים.

הקלטה התנהגות תאיים ב Myxococcus xanthus Biofilms באמצעות זמן לשגות Microcinematography

נחיל של ה-&delta;-proteobacterium Myxococcus xanthus מכיל מיליוני תאים הפועלים כקולקטיב, המתאמים תנועה באמצעות סדרה של...

המטרה הכוללת של הניסוי הבא היא לפתח בדיקת מיקרו-סינמטוגרפיה בשיטת time-lapse זולה, עם רמת דיוק מספקת להפקת תוצאות הניתנות לשחזור ולכימות. דבר זה מושג באמצעות שימוש באטמי סיליקון זולים וניתנים לשימוש חוזר לבניית פלטות מצע אגר או תבניות מיקרוסקופ. התוצאות המתקבלות מראות כי קומפלקסים של פלטות אלו נשארים רוויים במים ומחומצנים מספיק למשך יותר משבוע במגוון סוגי מצעים וריכוזי אגר.בנוסף, מכיוון שצילום מיקרו-סינמטוגרפיה בשיטת time-lapse הוא תהליך איטי, שימוש בשמונה מיקרוסקופים זולים מסייע להאצת רכישת הנתונים. שלום, אני רייאן טיילור מהמעבדה של ד"ר רוי וולש מהמחלקה לביולוגיה באוניברסיטת סירקוז. היום נדגים לכם פרוצדורה ליצירת סרטי time-lapse של ביופילמים חיידקיים; במעבדה שלנו, נשתמש בפרוצדורה זו כדי לחקור התנהגות רב-תאית של ביופילמים של MTIs.אז בואו נתחיל. כדי להתחיל בפרוצדורה זו, מדדו את צפיפות התאים של תרבית overnight של Occus sanus באמצעות מד עכירות (clut meter). העבירו 1 mL מהתרבית למבחנת צנטריפוגה של 2.5 mL, בצעו pellet, שטיפה ותליה מחדש של החיידקים במצע TPM כפי שמתואר בפרוטוקול הכתוב המצורף. השתמשו בפיפט ובמערבל Vortex כדי לתלות מחדש את המשקע באופן מלא, פעולה שעשויה להימשך זמן מה. לאחר מכן, הוסיפו 0.5 g של aros ל-50 mL של TPM, המשמש כמצע הבדיקה.הוסיפו גם 0.5 grams של aros ל-50 milliliters של C-T-T-Y-E, שזהו מצע תזונתי לדיסקים המועמד לאוטוקלאב לצורך עיקר. לאחר מכן, שמרו את המצע בטמפרטורה של 55 °C בתוך אינקובטור או אמבט מים, בזמן הכנת מערך המעקב.העבירו את קומפלקס הפלטות לבניית הדיסק התזונתי, ראשית באמצעות סטריליזציה בלהבה של זכוכית מיקרוסקופ. הניחו אטם גומי סיליקון סטרילי בעובי 0.5 millimeter על גבי העגלה. טפטפו באמצעות פיפטה כ-300 microliters של מצע C TT YE אל תוך הבאר שנוצרה על ידי האטם על העגלה.יש להעמיד את מצע ה-C-T-T-Y-E, לעקר על ידי להבה שקופית נוספת ולהניח אותה בזווית מעל מצע ה-C-T-T-Y-E. הנחת השקופית בזווית מונעת היווצרות בועות. לאחר שהשקופית במקומה, יש להצמיד את המבנה יחד באמצעות תפסים קטנים, אחד בכל צד.הנח את התצמיד הגזור בטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס והמתן עד שהמצע C-T-T-Y-E agro יתקשה. תהליך זה אורך בדרך כלל כחמש דקות. לאחר התקשות ה-agro, ניתן להכין את תצמידי הפלטות המשמשים במבחן המעקב.התחילו בהכנת השקופיות לבניית קומפלקסי הבדיקה. עבור כל קומפלקס, עקרו בלהבה שתי שקופיות זכוכית למיקרוסקופ. הניחו אטם של אוטוקלאב על אחת השקופיות כדי ליצור את בסיס הבדיקה.הזכוכית השנייה משמשת ליישור ה-agros וכזכוכית תמיכה. החלק העליון של הבדיקה הוא לבישת כיסוי. ראשית עטפו זכוכית מיקרוסקופ בסרט סימון, לאחר מכן עטרו לבישת כיסוי זכוכית בלהבה והניחו אותה מעל הזכוכית העטופה והמחוטרת.הזליגו למעלה את תומכי הזכוכית העטופים התומכים בזכוכית המכסה, כדי למנוע מהיא להיסדק. הניחו בעזרת פינצטה אטם לאוטוקלאב על גבי זכוכית המכסה שעברה סטריליזציה בלהבה. לחצו על האטמים שעל הזכוכית התחתונה ועל זכוכית המכסה כדי לוודא שהם יוצרים איטום עם הזכוכית.אחרת, מערכי המצע עלולים להתייבש. הניחו את מכלולי אטם העגלה ואטם לביבית הצפייה בצד, כאשר הצדדים הסטריליים פונים כלפי מעלה; מכאן והלאה עבדו על קומפלקס אחד בלבד בכל פעם כדי למנוע התמצקות של מערכי המצע, מה שיוביל לאיכות סרטון נמוכה. התחילו בהנחת הדיסק התזונתי.הוצא את קומפלקס דיסק ההזנה מטמפרטורה של ארבע מעלות צלזיוס. הסר את כיסוי החסימה וחשוף את ה-C-T-T-Y-E agar שהתגבש כעת באמצעות פיפט דגימה מיקרוסקופית עם טיפ זכוכית חד-פעמי של 100 µL. הסר דיסק הזנה בקוטר של 1 mm ממצע ה-C-T-T-Y-E agar והנח אותו בבאר שנוצרה על ידי האטם בכיסוי הזכוכית.לאחר מכן, הוציאו את טבעות מצע ה-TPM מהאינקובטור וטפטפו 300 µL אל תוך הבאר שנוצרה על ידי האטם על ליתוש הכיסוי ומכילה את הדיסק התזונתי. טבעות מצע ה-TPM צריכות להגביה כדי להשטיח את מצע ה-T-P-M-S-A. הניחו אחת מהשקופיות שעברו סטריליזציה בלהבה וללא אטם בזווית מעל טבעות מצע ה-TPM. הנחת השקופית בזווית מסייעת במניעת היווצרות בועות.חבקו את הקומפלקס באמצעות תפסני נייר קטנים, אחד בכל צד. הניחו את הקומפלקס המחובק בטמפרטורה של 4 °C ואפשרו למצע להתגבש. פעולה זו אורכת בדרך כלל כחמש דקות.לאחר שהמדיה שהוכנה התגבשה, הוצא את המכלופת מתוך טמפרטורה של 4 °C. הסר את תפסני הנייר ולחץ על קצה המכלופת. כדי לשחרר את השקופית העטופה בסרט, הוצא אותה והנח אותה על השולחן לשימוש בהמשך.לאחר מכן, השתמשו בפינצטה כחוטב. הפרידו את קומפלקס זכוכית הכיסוי, האטם ומערך המדיום מהשקופית התומכת והשליכו את השקופית התומכת. אין להשתמש בתנועת מינוף כדי להפריד את קומפלקס זכוכית הכיסוי והאטם, שכן הדבר עלול להוביל לשבירת זכוכית הכיסוי ו/או להידבקות מערך המדיום לשקופית התומכת.לאחר הסרת שקף התמיכה, הנח את קומפלקס מערך המדיום של אטם כיסוי השקף על השקף העטוף בסרט דביק, כאשר צד האטם פונה כלפי מעלה. הנח קומפלקס זה ליד מבער כדי לאפשר לכל הלחות הנראית להתאדות מפני השטח החשוף של ה-media agros. אין להניח למדיום ה-media agros להתייבש למשך יותר מדקה אחת.מכיוון שדבר זה עלול להשפיע על התנהגות הנחיל של M Zant, המשך לזריעת התאים על קומפלקס הבדיקה שהוכן זה עתה. לאחר שהלחות העודפת התאדתה מאטמי לבישת המצע של זכוכית הכיסוי, שאב 0.5 µL של התאים המרוכזים להנחה על המצע. שחרר את קצה הפיפטה לפני ההגעה למצע.טיפה של תאים מופיעה בקצה התחתון של טיפ הפפיטה, מה שמקל על הפקדת התאים מבלי שהטיפ ייגע במצע הג'ל. שקע על פני השטח של הג'ל עלול לשנות את התנהגות נחיל התאים. הנידו את הפפיטה ישר למטה כדי להנחית את התאים במרחק של כ-1 מילימטר מהדיסק התזונתי המוטמע.לאחר מכן, משוך את הפיפטה ישירות כלפי מעלה. באופן זה, ניתן להבטיח שהמרקם יהיה מעגלי. לאחר השקעת התאים, הנח את המכלול לצד המבער כדי לאפשר לנקודת התאים להתייבש למשך לא יותר מ-20 שניות.לאחר הייבוש, יישרו את מכלול אטם העגלה המהווה את בסיס הקומפלקס עם האטם שבמכסה. החליקו את מדיה אטם acro cell complex המהווה את חלקו העליון של הקומפלקס. לחצו בעדינות כדי ליצור איטום.נקה את פני השטח של הזקיקה והמכסה בעזרת נייר ניקיון (Kimwipe) כדי להסיר שאריות ולמנוע עיבוי. הנח את המכלול עלבמת המיקרוסקופ המחוממת מיד לאחר ניקוי הזקיקות, כאשר הזקיקה כלפי מטה והמכסה כלפי מעלה. אם נוצר עיבוי, המתן מספר שניות עם המכלול על הבמה המחוממת לפני הפעלת התוכנה לרכישת תמונות.על מנת להכין את הסרט, בחרו בעדשה המתאימה במיקרוסקופ, 2x, 4x או 10x. הפעילו את המצלמה ואת המיקרוסקופ ובדקו את רמות התאורה כדי לוודא שהאור אינו חזק מדי. הפעילו את המחשב ופתחו את תוכנת רכישת התמונות.לחצו על חלון התמונה החיה וכוונו את המיקרוסקופ. התמונה תיראה דומה לזו המוצגת כאן. התחילו ברכישת התמונות.יש לוודא את המיקוד באופן קבוע במהלך השעה הראשונה, שכן האגר במצע נוטה לשקוע, מה שגורם לסטייה במיקוד. לאחר השלמת רכישת התמונות, העבירו את התמונות שנרכשו לאחסון. פרקו את מכלול העגלה על ידי השריה ב-90% ethanol למשך לילה או בצעו TOLA לאטמים לצורך שימוש חוזר.סרט Time lapse זה מציג תאים שהוכפפו לבדיקת המעקב המתוארת כאן. קצב הצילום הוא תמונה אחת לדקה בהגדלה של 20x, וקצב ההשמעה הוא 60 תמונות לשנייה. סרט Time lapse זה מציג אוכלוסייה של תאים שבה 1% מהתאים מביעים GFP.הסרטון הורכב על ידי מיזוג תמונות של ניגודיות פאזה (phase contrast) ותמונות פלואורסצנטיות לסירוגין. הבדיקה בוצעה על C-T-T-Y-E ב-1%Aros; קצב הלכידה הוא תמונה אחת לדקה בהגדלה של 100 x. סרטון time-lapse זה מציג את הניידות הגלישה (gliding motility) של M Anthes.בדיקה זו בוצעה ב-C-T-T-Y-E ב-1%Aros; קצב הלכידה הוא תמונה אחת לדקה בהגדלה של 100 x. סרטון TimeLapse זה מראה תנועתיות twitching של P OSA. בדיקה זו בוצעה ב-LB ב-1%Aros; קצב הלכידה הוא תמונה אחת לדקה.בהגדלה של 20 x קצב השמירה הוא 60 תמונות לשנייה. סרט time lapse זה מציג מוטיליות של נחילים של Smar senses. בדיקה זו בוצעה על LB ו-1%Aris, כאשר קצב הלכידה הוא תמונה אחת לדקה.בגדלה של 20x קצב ההשמעה הוא 60 תמונות לשנייה. סרט time lapse זה מציג ניידות החלקה של EGT. בדיקה זו בוצעה ב-LB ב-0.5%Tag קצב הלכידה הוא תמונה אחת לדקה ובגדלה של 20x קצב ההשמעה הוא 120 תמונות לשנייה בשל שבירותו של 0.5%arose ב-lv.בדיקה זו משתמשת באטמים הגדולים יותר הנראים באיור 1 B. כעת הצגנו כיצד להפיק סרטוני time-lapse של ביופילם חיידקי. בעת ביצוע פרוצדורה זו, חשוב לזכור לפעול בנינוחות ולהיות מדויקים ככל האפשר כדי להשיג תוצאות עקביות.זהו זה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים שלכם.

recording-multicellular-behavior-myxococcus-xanthus-biofilms-using

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

פרוטוקול זה מספק הליך צעד אחר צעד כדי לפקח על התנהגות תא בודד של חיידקים שונים בתוך זמן באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי אוטומטיות זמן לשגות. יתר על כן, אנו מספקים הנחיות כיצד לנתח את תמונות מיקרוסקופ.

תא הדמיה חיה של Bacillus subtilis ו Streptococcus pneumoniae באמצעות מיקרוסקופית אוטומטי זמן לשגות

שיטה זו מאפשרת ניטור של תאים בזמן אמת מדידות כמותיות של פרמטרים שונים הגירה סלולריים כגון מהירות, תזוזה, ומהירות. שלא כמו שיטות מסורתיות, גישה זו בזמן אמת אינה מבוססת על מדידות כמותיות נקודות קצה הגירה, אלא היא מאפשרת ניטור חישוב פרמטרים שונים ברציפות.

ניתוח כמותי של הגירה אקראית של תאים באמצעות זמן לשגות מיקרוסקופית וידאו

מקור: Oms, T., et al. ניתוח אוכלוסייה ותאים בודדים של התמדה אנטיביוטית ב- Escherichia coli. J. Vis. Exp. (2023)סרטון זה מציג פרוטוקול לניטור תאי חיידקים בודדים המבטאים חלבון קושר DNA בעל תווית פלואורסצנטית בתוך מערכת מיקרופלואידית. הוא ממחיש כיצד אנטיביוטיקה מעכבת את רוב התאים, בעוד שתת-אוכלוסייה של תאים מתמידים שורדת את הטיפול וגדלה מחדש לאחר הסרת האנטיביוטיקה.

מיקרוסקופ זמן-lapse מיקרופלואידית לחקר התמדה אנטיביוטית בחיידקים

מקור: שומאכר, ד. ואחרים. הדמיית תאים חיים פלואורסצנטיים של מחזור התאים הצמחיים המלא של החיידק החברתי המתפתח באיטיות Myxococcus xanthus. J. Vis. Exp. (2018)הסרטון הזה מדגים את ההכנה וההדמיה של Myxococcus xanthus, חיידק קרקע שגדל לאט. התרבית גדלה במדיום, מונחת על כיסוי עם מיקרוספירות פלואורסצנטיות, ומעליה כרית אגרוז מחוממת מראש לתמיכה בהידרציה ואספקת חומרים מזינים. מערך זה מאפשר הדמיה חיה ארוכת טווח של תהליכים תאיים בזמן חלוקת תאים חיידקיים.

הכנת דגימות מיקסוקוקוס קסנתוס להדמיה של תאים חיים

מקור: שומאכר, ד., וסוגארד-אנדרסן, ל. הדמיית תאים חיים פלואורסצנטיים של מחזור התאים הצמחיים המלא של החיידק החברתי המתפתח באיטיות Myxococcus xanthus. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים את השימוש בהדמיית תאים חיים למעקב אחר מקורות כרומוזומים מסומנים פלואורסצנטית במהלך חלוקת תא חיידקים. הוא לוכד את דינמיקת הפרדת הכרומוזומים באמצעות מיקרוסקופיה של ניגודיות פאזה ופלואורסצנציה.

הדמיית טיים-לאפס של הפרדת כרומוזומים בחיידקים מסומנים פלואורסצנטית

מקור: Makowski, Ł., ואחרים. הדמיה של תאים חיים של טורף חיידקי Bdellovibrio bacteriovorus באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנציה בזמן-לפס. J. Vis. Exp. (2020)סרטון זה מדגים הדמיית פלואורסצנציה בזמן אמת של חיידק בדלוביבריו הטורף E. coli מקובע מתחת לכרית אגרוז, ומאפשר הדמיה בזמן אמת של שכפול תוך-תאי ושחרור צאצאים לצורך חקר טורף חיידקים ואינטראקציות בין מאכסן-פתוגנים.

דימות טיימלפס בתאי חיים של טורפות בקטריובורוס של Bdellovibrio על E. coli

מיקרוריאולוגיה של מעקב אחר חלקיקים חוקרת את הצמיגות של חומרים. כאן, הטכניקה משמשת לקביעת הצמיגות, תאימות הזחילה ותפקידי הצלבה יעילים של רכיבי מטריצה שונים של ביופילם חיידקי. המטריצה מורכבת מחומרים פולימריים המופרשים על ידי החיידקים ומרכיביה קובעים את מבנה הביופילם ואת התכונות המכניות.

במיפוי באתרו של התכונות מכניות של Biofilms ידי Microrheology מעקב חלקיקים

במחקר זה, תא זרימת ננו-microfluidic הועסק לדמיין והן מבחינה תפקודית לאפיין את תנועתיות והמרטיטה של Xylella fastidiosa, חיידק הגורם למחלה של פירס גפן.

ויזואליזציה של תנועתיות מפרכסים אפיון תפקידו של<em&gt; PilG</em&gt; ב<em&gt; Fastidiosa Xylella</em

תאים חיידקיים במרחב מאוד מאורגנים. כדי לבצע את הארגון הזה לאורך זמן בתאים Myxococcus xanthus גדל לאט, פותחה מלכודת קרינה פלואורסצנטית הדמיה לחיות תאים עם רזולוציה גבוהה ייתכן במשך מספר דורות. באמצעות שיטה זו, ייתכן הדינמיקה של חלבונים חשובים על כרומוזום סגרגציה ועל חלוקת התא יכול להיקבע.

קרינה פלואורסצנטית Live-תא הדמיה של שלמה וגטטיבי תא מחזור של חיידק חברתית גידול איטי Myxococcus xanthus

אנו מציגים פרוטוקול לבידוד ותרבות של תאים מזנכימליים הפליאטוניים של עכבר ראשוניים להדמיה של צמיחה דו-ממדית (2D) ובגידות לתיקון פצעים. אנו מספקים גם את המתודולוגיה לניתוח נתוני ההדמיה של זמן לשגות כדי לקבוע היווצרות זרם תאים תנועתיות כיוונית.

בידוד והדמיה בזמן-לשגות של תאי מזנשים הפליאטל העוברי הראשי של העכבר כדי לנתח תכונות תנועה קולקטיבית

למדו צילום מיקרו-קולנועי בזמן אמת לחקירת התנהגות נחיל בקטריות Myxococcus xanthus. השיטה משתמשת בחומרים זולים וניתנים לשימוש חוזר לתוצאות מדידות וברות-השוואה.

הקלטה התנהגות תאיים ב Myxococcus xanthus Biofilms באמצעות זמן לשגות Microcinematography

גלה סרטונים נוספים