August 28th, 2010
טכניקה שלמים תרבות העובר מאפשר לנו עכבר התרבות עוברי חולדה לשעבר vivo מצב בתקופות מוגבל המתאים בשלבים midgestation. בפרוטוקול הווידאו הזאת, אנחנו מדגימים את הנהלים תקן של התרבות שלנו עובר שלם חולדה לאחר E12.5 באמצעות המפרק מסוג התרבות מערכת בקבוק.
בביולוגיה התפתחותית, ישנם בעלי חיים שונים המשמשים לניסוי. טכניקת חקלאות הור של עוברי ריקבון הוקמה בשנות ה-50 של המאה ה-20 והתפתחה לפני הקמת המניפולציה הגנטית המודרנית בחקלאות הוואי. מנהל מוחלש מכוון ישירות לאזורים של אהבה עם למות או טרנספקט של גנים מכיוון שניתן לתפעל עוברים וכמיקרוסקופ, לכן תרבית אמבר שלמה היא כלי שימושי מאוד.
כאשר אנו רוצים לחקור את תהליך ההתפתחות הדינמי של עוברים מאורים לאחר התפתחות לאחר ההשתלה. גדילת העוברים המאוריים תלויה באופן קריטי במציג התפקודי, המגביל את תקופת התרבית. באופן כללי, אנו יכולים לתרבית עוברים במהלך התקופה של היום העוברי 8.5 עד 14.5 בחולדה, ו-E 6.5 ו-12.5 בעכבר.
במעבדה אנו מגדלים עוברי חולדות ועכברים באמצעות מערכת תרבית מסתובבת. מערכת תרבית זו פופולרית ביותר ומתאימה לתרבית של עוברי חולדות ועכברים במהלך הריון עופרת. כלומר אחרי E 11.5 ו-9.5 באדום ועכברים.
בסרטון זה, ברצוננו להציג את הפרוטוקול הסטנדרטי שלנו לתרבית רעבה באמצעות עוברי E 12.5 RU. במצב זה, ניתן לתרבת את העובר במשך יומיים, וזה מספיק כדי לבחון את המניפולציות היעילות השונות בחקלאות. ישנם שני שלבים קריטיים להצלחה.
ראשית, הליך הדיסקציה צריך להיות מדויק כדי לא לפגוע בעובר, במיוחד בכלי המוט. שנית, ההליך צריך להיות מהיר ככל האפשר. זה נכון במיוחד עבור העוברים המבוגרים יותר.
לדוגמה, במקרה של עוברי עכברים E 10.5, הם צריכים להיות מועברים תוך 30 דקות. יישמנו טכניקת תרבית עובר שלם עבור חבילה של שישה עוברים ימניים מוטנטיים. לדוגמה, אנו מנתחים את דפוס הנדידה של תאים עצביים במוטציה על ידי אהבת מספר קטן של תאים עם צבע או על ידי השתלת תאים ברמה בעוברים מסוג לבן ורקע מושתק.
יתר על כן, ביססנו שיטה להעברת גנים לעכברים מתורבתים ולעוברים אדומים על ידי פעולה חשמלית המשתמשת בשוק חשמלי. אנו יכולים פשוט להכניס מבנים של גנים אקסוגניים, צורות שליליות דומיננטיות ו-siRNA באזור המוח המתפתח. לכן, אנו יכולים לנתח בקלות תפקודי גנים על ידי אובדן תפקוד וניסויי פונקציית רווח.
אנו חוקרים גם התנהגות של תאים מפולסים עם GFP או RFP באמצעות תרבית איברים או תרבית פרוסות או חקלאות. אז אתה יכול לעשות מגוון ניסויים באמצעות תרבית Lio בשילוב של טכניקות אחרות.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
פרוטוקול הווידאו הזה מדגים את טכניקת התרבות העוברית השלמה לעוברים של חולדות לאחר E12.5 באמצעות מערכת תרבות בקבוק מסוג רוטטור. שיטה זו מאפשרת תרבות ex vivo בשלבים קריטיים של אמצע ההיריון.
The rotator-type whole embryo culture (WEC) system enables direct manipulation and observation of rodent embryos during critical midgestation stages, supporting mechanistic de-risking in early discovery. This ex vivo platform allows for precise genetic and cellular interventions, facilitating functional target validation and pathway interrogation before in vivo studies. Its reproducibility and adaptability make it a valuable asset for translational research and portfolio triage in developmental and disease modeling.
The rotator-type WEC system bridges early discovery and preclinical research by enabling hypothesis-driven manipulation and quantitative analysis of embryonic development. Positioned between in vitro assays and in vivo models, it offers a unique platform for mechanistic studies and target de-risking.