Name: גדילה והתמיינות של מבוגרים בהיפוקמפוס סנאי הארקטי קרקע תאים גזע עצביים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-07T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: למדו כיצד לזרוע, להרחיב ולהבדיל תאי גזע עצביים מהיפוקמפוס של סנאי ארקטי מבוגרים. שיטה זו מאפשרת לחקור נוירוגנזה ולפתח טיפולים פוטנציאליים לאירועי מוח ולב.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מחקר בארה&quot;ב רפואי וציוד פיקוד הצבא להעניק # 05178001 ועל ידי NS041069-06 מן המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ. אנו מודים יואל Vonnahme על הערות מועילות על פרוטוקול.

<ol><li>Barnes, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Freeze+avoidance+in+a+mammal%3A+body+temperatures+below+0+degree+C+in+an+Arctic+hibernator%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator.</a> Science. 244, 1593-1595 (1989).</li>
<li>Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arctic+ground+squirrel+brain+is+resistant+to+injury+from+cardiac+arrest+during+euthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The Arctic ground squirrel brain is resistant to injury from cardiac arrest during euthermia.</a> Stroke. 37, 1261-1265 (2006).</li>
<li>Dave, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+kinase+C+epsilon+activation+delays+neuronal+depolarization+during+cardiac+arrest+in+the+euthermic+arctic+ground+squirrel%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Protein kinase C epsilon activation delays neuronal depolarization during cardiac arrest in the euthermic arctic ground squirrel.</a> J Neurochem. 110, 1170-1179 (2009).</li>
<li>Ross, A. P., Christian, S. L., Zhao, H. W., Drew, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistent+tolerance+to+oxygen+and+nutrient+deprivation+and+N-methyl-D-aspartate+in+cultured+hippocampal+slices+from+hibernating+Arctic+ground+squirrel%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Persistent tolerance to oxygen and nutrient deprivation and N-methyl-D-aspartate in cultured hippocampal slices from hibernating Arctic ground squirrel.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 26, 1148-1156 (2006).</li>
<li>Christian, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arctic+ground+squirrel+%28Spermophilus+parryii%29+hippocampal+neurons+tolerate+prolonged+oxygen-glucose+deprivation+and+maintain+baseline+ERK1%2F2+and+JNK+activation+despite+drastic+ATP+loss%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Arctic ground squirrel (Spermophilus parryii) hippocampal neurons tolerate prolonged oxygen-glucose deprivation and maintain baseline ERK1/2 and JNK activation despite drastic ATP loss.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1307-1319 (2008).</li>
<li>Jin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+stroke-induced+neurogenesis+in+the+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Evidence for stroke-induced neurogenesis in the human brain.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 13198-13202 (2006).</li>
<li>Maysami, S., Lan, J. Q., Minami, M., Simon, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proliferating+progenitor+cells%3A+a+required+cellular+element+for+induction+of+ischemic+tolerance+in+the+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Proliferating progenitor cells: a required cellular element for induction of ischemic tolerance in the brain.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 28, 1104-1113 (2008).</li>
<li>Sung, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia%2Freoxygenation+stimulates+proliferation+through+PKC-dependent+activation+of+ERK+and+Akt+in+mouse+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Hypoxia/reoxygenation stimulates proliferation through PKC-dependent activation of ERK and Akt in mouse neural progenitor cells.</a> Neurochem Res. 32, 1932-1939 (2007).</li>
<li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+adult+rat+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of adult rat hippocampal neurons.</a> J Neurosci Methods. 71, 143-155 (1997).</li>
<li>Palmer, T. D., Takahashi, J., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+adult+rat+hippocampus+contains+primordial+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The adult rat hippocampus contains primordial neural stem cells.</a> Mol Cell Neurosci. 8, 389-404 (1997).</li>
</ol>

JA קלהר, אנדרסון הוא המייסד של Neuronascent והוא ממציא על סנאי הקרקע יישומים הארקטי פטנט. Neuronascent מקבל תמלוגים על מכירת AGS מדיה בתאי גזע. RC McGee מועסק על ידי, עורק חיים בע&quot;מ אשר מפיצה את התקשורת AGS בתאי גזע עצביים.

AGS תאים בוגרים גזע עצביים הם חזקים והוא יכול להיות מורחבת קטעים רבים שהופך אותם מקור מצוין בתאי גזע עצביים ללימוד בסיסי של תכונות תא גזע עצביים. קצב ההתפשטות הוא בערך מוכפל כל עשרים וארבע שעות, אבל תאים אלה חייבים להיות passaged לפני מפגש לכת כי המגע בין תאים תעדיף בידול כדי האסטרוציטים. צור בתיווך בידול ולכן יהיה לגרום היחס בין הנוירונים למספר התא הכולל ירידה דרמטית, אם בידול מתחיל לפני trypsinization ומעבר. איור 1 מדגים עצבי תא גזע AGS תרבות שיש passaged בתוך 24 שעות. <p cl...

<table><tbody><tr><td>agsNSC</td><td>Lifeline Cell Technology</td><td>FC-0004</td><td></td></tr><tr><td>ערכה להרחבת agsNSC</td><td>Lifeline Cell Technology</td><td>LL-0008</td><td>מקור חלופי עבור DMEM/F12, B27 ו-rhFGFb (&lt;a href=&quot;http://www.invitrogen.com">www.invitrogen.com&lt;/a&gt;)</td></tr><tr><td>ערכה להבחנה של agsNSC</td><td>Lifeline Cell Technology</td><td>LL-0009</td><td>מקור חלופי עבור DMEM/F12 ו-ITS-x (&lt;a href=&quot;http://www.invitrogen.com">www.invitrogen.com&lt;/a&gt;)</td></tr><tr><td>ערכה למצע תחזוקה של NeuraLife</td><td>Lifeline Cell Technology</td><td>LL-0012</td><td>מקורות חלופיים הם NeuraBasal (LifeLine) או Neurobasal (Invitrogen), גלוטמין ו-B27 (&lt;a href=&quot;http://www.invitrogen.com">www.invitrogen.com&lt;/a&gt;). תאים מובחנים נשמרים עד 3 שבועות ב-NeuroLife, אך לא יותר מ-2 שבועות ב-Neurobasal (&lt;a href=&quot;http://www.invitrogen.com">www.invitrogen.com&lt;/a&gt;)</td></tr><tr><td>מיקרומטר (כגון תא ספירה Bright Line)</td><td>Hausser Scientific</td><td>1490</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm">http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>פלטות 96 בארות מצופות Poly-L-Lysine מבית Biocoat</td><td>BD Biosciences</td><td>356516</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.bdbiosciences.com">www.bdbiosciences.com&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>טיפים לפיפט עם פתח רחב</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-707-141</td><td>מונע נזק לתאים עצביים בעת פיפטור. &lt;a href=&quot;http://www.fishersci.com">http://www.fishersci.com&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

גדילה והתמיינות של מבוגרים בהיפוקמפוס סנאי הארקטי קרקע תאים גזע עצביים

Growth and Differentiation of Adult Hippocampal Arctic Ground Squirrel Neural Stem Cells

סנאים הארקטי הקרקע (Urocitellus parryii, AGS) הם ייחודיים ביכולתם שינה עם טמפרטורת הליבה גוף ליד או מתחת לאפס 1. בעלי חיים אלה גם להתנגד לפגיעה איסכמית למוח in vivo 2,3 ו בחמצן גלוקוז קיפוח במבחנה 4,5. אלו תכונות ייחודיות סיפק את הדחיפה כדי לבודד נוירונים AGS לבחון מאפיינים עצביים הטבועה זה יכול להסביר את היכולת של נוירונים AGS להתנגד פציעה ומוות התא הנגרם על ידי איסכמיה וטמפרטורות נמוכות מאוד. חלבונים או זיהוי מטרות הגן המאפשרים את המאפיינים הייחודיים של התאים האלה יכול לסייע לגילוי טיפולים יעילים במשך מספר אינדיקציות איסכמית לחקר סובלנות קר. ההיפוקמפוס למבוגרים AGS מכיל בתאי גזע עצביים אשר ממשיכים להתרבות, ומאפשר הרחבה קלה של אלה בתאי גזע בתרבות. אנו מתארים כאן השיטות שבהן חוקרים יכולים להשתמש אלה בתאי גזע נוירונים הבדיל עבור כל מספר של מטרות. על ידי ביצוע השלבים הבאים מקרוב התאים העצביים AGS גזע ניתן להרחיב באמצעות שני קטעים או יותר, ואז הבדיל לתרבות גבוהה TUJ1 חיובי נוירונים (~ 50%) ללא שימוש בכימיקלים רעילים כדי למזער את מספר התאים המתחלקים. איסכמיה גורמת neurogenesis 6 ו neurogenesis אשר ממשיך דרך ה-MEK / ERK מסלולים PI3K/Akt הישרדות איתות תורם התנגדות איסכמיה in vivo 7 ו במבחנה 8 (קלהר, אנדרסון, דרו et al., בהכנה). אפיון נוסף של תאים עצביים אלה ייחודיים יכולים לקדם בחזיתות רבות, תוך שימוש בחלק או בכל השיטות הללו.

בתאי גזע עצביים הוכנו מן ההיפוקמפוס של מבוגרים שאינם חורף סנאים בן שנה הארקטי הקרקע (AGS). תאים אלה גזע עצביים ניתן להרחיב באמצעות מעברים רבים, להיבדל ומתוך רצון להישמר כמו נוירון 50:50 כמעט לתרבות גליה.

סנאיי קרקע ארקטיים (*Urocitellus parryii*, AGS) הם ייחודיים ביכולתם להתרשן (hibernate) כאשר טמפרטורת הגוף הליבבית שלהם קרובה לאפס או נמוכה ממנו 1. אלה...

המטרה הכללית של פרוצדורה זו היא לזרע, להרחיב ולהבדיל תאי גזע עצביים שהופקו מההיפוקמפוס של סנאי קרקע ארקטי בן שנה בוגר שאינו בטורדורה. מטרה זו מושגת תחילה על ידי זריעה של תאי הגזע העצביים של ה-A GS. לאחר מכן, מרחיבים וזורעים את תאי הגזע העצביים לתוך מצע בידוד.השלב השלישי של הפרוצדורה הוא גבייה ותחזוקה של הנוירונים, ולבסוף, התאים מקובעים או מטופלים ומקובעים לצורך אנליזה. בסופו של דבר, ניתן להשיג תוצאות המראות שפרוגניטורים נוירונליים של GS ממשיכים להתחלק לאורך שבועיים של גבייה ותחזוקה, ואפילו תחת תנאים איסכמיים. מספר הנוירונים נקבע באמצעות טכניקות של צביעה ומיקרוסקופיה פלואורסצנטית המודדות יחסי נוירונים.ההשלכות של טכניקה זו משתרעות עד לגילוי טיפולים עבור שבץ מוחי ודום לב. מכיוון שנוירונים מובחנים של סנאי קרקע ארקטי עמידים לכל פגיעה איסכמית, הכין לפני תחילת הפרוצדורה את הבקבוק שבו ישמש להתרבות של A-G-S-N-S-C על ידי ציפויים ב-polyol ornithine. השאר את תמיסת העבודה של Polyol Ornithine בתוך האינקובטור.לאחר ההפשרה, ניתן לאחסן את התמיסה למשך עד חודש אחד בטמפרטורה של 2°C עד 8°C. הוסיפו 8 mL של תמיסת עבודה של Polyol ornithine לבקבוק T 75 מאוורר, ופזרו את התמיסה באופן שווה על פני כל שטח התרבית של הבקבוק. דגרו את הבקבוק בטמפרטורה של 37°C למשך 24 שעות לפחות, רצוי באינקובטור ללא CO2 מוסף, לפני השימוש.שאבו את תמיסת העבודה של Polyol ornithine מהבקבוק ושטפו פעמיים עם מים סטריליים לתרבית רקמות. שאבו את הנוזל עד שהבקבוק כמעט יבש לפני השימוש להפשרה והזרעה של תאי גזע עצביים של סנאי קרקע ארקטי (arctic ground squirrel neural stem cells). ראשית, הוציאו מבחנה של A-G-S-N-S-C ממכלי החנקן הנוזלי ובדקו שפקק המבחנה אטום היטב.החזיקו את החלק העליון של הבקבוקון בעודו מושאר בחציו התחתון בתוך אמבט מים בטמפרטורה של 37 °C למשך כ-60 עד 90 שניות. השאירו את פקק הבקבוקון מחוץ למים כדי למנוע זיהום פוטנציאלי. הוציאו את הבקבוקון מאמבט המים כאשר הוא כמעט מפשיר לחלוטין.כמות קטנה של קרח צריכה להישאר גלויה. אין להפשיר יתר על המידה, שכן הדבר עלול לפגוע בתאים. רסס את החלק החיצוני של המבחנה ב-70% ethanol או isopropanol, ולאחר מכן העבר את המבחנה לקבנט בטיחות ביולוגית.הסר את הפקק בזהירות כדי למנוע זיהום או התזה. באמצעות פיפטה סטרילית, הוסף 1 mL של מצע בסיסי (basal medium) לתוך המבחנה וערבב בעדינות.שעלו את התאים. העבירו את התאים ששועלו ל-25 milliliters של מצע בסיס חם בתוך מבחנה לצנטריפוגה בנפח 50 milliliters. צנטריפוגו את התאים ב-150 G למשך שש דקות עד להשקעת התאים.הוסיפו 10 milliliters של מצע הרחבה לבקבוק T 75 יבש מצופה ב-poly L ornithine, ולאחר מכן הוסיפו 40 microliters של Rh FGF basic. עם סיום הסנטריפוגציה, שאבו את הנוזל בזהירות מבלי לשאוב את המשקע. השעו את התאים ב-10 milliliters של מצע הרחבה.העבירו את התאים לאחר השביעה (resuspension) למצע שבתוך בקבוק ה-T 75. נערו בעדינות את הבקבוק מצד לצד כדי להפיץ את התאים באופן אחיד בתוך הכלי. הכניסו את הבקבוק עם התאים לאנקובטור בטמפרטורה של 37 degrees Celsius ו-5% carbon dioxide.התאים צריכים להיצמד לבקבוק ולהתחיל להוציא שלוחות בתוך שעתיים מהזריעה, ביום שלאחר ההחדרה. יש להוסיף לבקבוק ה-A-G-S-N-S-C כמות של 40 µL של Rh FGF basic. יומיים לאחר הפשרת התאים וזריעתם, יש לבצע החלפה מלאה של המצע באמצעות 20 mL של מצע הרחבה בתוספת 40 µL של RH FGF basic, ביום השלישי או הרביעי לאחר ההחדרה.יש להעביר את תאי ה-A-G-S-N-S-C באופן הבא: שאבו את המצע מתוך הבקבוק מסוג T 75 והוסיפו 2.5 milliliters של trypsin EDTA; סובבו בעדינות כדי להבטיח שכל התאים מצופים ב-trypsin EDTA והקישו בעדינות על דפנות כלי התרבית מכמה צדדים כדי לעודד את ניתוק התאים. לאחר שהתאים ניתקו, הוסיפו לבקבוק 10 milliliters של מצע בסיסי וסובבו בעדינות כדי להבטיח שכל תמיסת ה-trypsin נוטרלה.העבירו את התאים באמצעות פיפט לשפופרת צנטריפוגה סטרילית המכילה 10 milliliters של מצע בסיסי. לאחר מכן, שטפו את הבקבוק עם 10 milliliters נוספים של מצע בסיסי ואחדו אותם עם השטיפה הראשונה; צנטריפוגו את התאים ב-150 G למשך שש דקות. לאחר הצנטריפוגה, התאים אמורים ליצור משקע נקי ורופף; שאבו את העלייה מהשפופרת.לאחר מכן, באמצעות פפטה של 10 מיליליטר, הוסיפו 10 מיליליטר של מצע בסיסי שחומם מראש, ובצעו רסספנזיה. תלו את משקע התאים על ידי פיפטינג עדין למעלה ולמטה פעמיים. אם תהליך זה יבוצע בדייקנות, ניתן לצפות לתבואה של שלושה הכפלות או יותר, המעניקה אוכלוסייה של יותר מ-4 מיליון תאים ממספר ראשוני של כ-500,000; נדגים את接接接접종 של A-G-S-N-S-C לתוך פלטת 96 בארות מצופה ב-poly L lysine לצורך דיפרנציאציה, אם כי ניתן להשתמש בכל פורמט של פלטות עם מספר בארות להליך זה.ראשית, קבעו את נפח תרחיף התאים הדרוש לניסוי שלכם ואת כמות ה-FBS שיש להוסיף למצע ההבחנה של A-G-S-N-S-C כדי להגיע לריכוז סופי של 2%FBS. דוגמה לחישובים אלו מוצגת בטקסט הפרוטוקול הבא בתוך קבסינת בטיחות ביולוגית. ערבבו את ה-FBS ואת מצע ההבחנה.לאחר מכן, ערבבו בזהירות את התאים עם נפח מחושב של מצע דיפרנציאציה עם FBS והעבירו את התאים שבתוך המצע למכל combi tip סטרילי. באמצעות פיפט רב-ערוצי וטיפים בעלי פיה רחבה, העבירו 200 µL של תרחף תאים מדולל מהמכל לכל באר בלוח 96 בארות מצופה poly L lysine. דגרו את הלוח למשך שעה וחצי עד שעתיים ב-37 °C וב-5% carbon dioxide כדי לאפשר לתאים להיקשר למצע.החלפת המדיום יכולה להיות חלק מאתגר בטכניקה זו, מכיוון שניתן לפגוע בתאים בעת שימוש בקצות פיפט רגילים. לכן, אנו משתמשים בקצות פיפט בעלי פתח רחב (large orifice) כדי למנוע פגיעה בתאים במהלך החלפת המדיום. לאחר שהתאים נצמדו, הסרו בזהירות 50% מהמדיום מכל באר, שהם 100 µL במקרה זה, באמצעות קצות פיפט בעלי פתח רחב.החליפו בזהירות את הנפח שהוסר במצע דיפרנציאציה חם. שוב, השתמשו בקצות פיפטה בעלי פתח רחב. דגרו את הפיתנג בטמפרטורה של 37 °C, 5% carbon dioxide, יומיים לאחר ההזרקה.בצע החלפה של 50% מהמדיום באמצעות מדיום דיפרנציאציה וטיפים של פיפט עם פתח גדול. יש להכין את מדיום התחזוקת הנוירונלית לתחזוקת נוירונים מדי שבוע בהתאם להוראות היצרן. יומיים לאחר הדיפרנציאציה האחרונה.החלפת מצע. בצע החלפה של 50% מהמצע באמצעות מצע לתחזוקת נוירונים. הסר בזהירות 100 microliters של מצע דיפרנציאציה מכל באר באמצעות טיפים של פיפט עם פתח רחב, והחלף ב-100 microliters של מצע לתחזוקת נוירונים.המשיכו לבצע החלפות של 50% מהמדיום באמצעות מדיום תחזוקה עצבי כל יומיים עד שלושה ימים. זקיקים עצביים אמורים להופיע תוך מספר ימים מהמעבר למדיום תחזוקה עצבי. יש להשתמש בתאים תוך שלושה שבועות מהעברתם לתחזוקה עצבית.סנאי קרקע ארקטי בינוני. תאי גזע עצביים בוגרים ימשיכו להכפיל את מספרם מדי 24 שעות למשך שלושה עד חמישה ימים למשך לפחות שני מעברים כאשר הם נזרעים בריכוז של 500,000 עד 600,000 תאים לבקבוק של 75 סמ"ר. מיקרוגרף זה בהגדלה של 100x מציג תאי גזע עצביים מההיפוקמפוס של סנאי קרקע בוגר לאחר שלושה ימים של גידול ב-A-G-S-N-S-C.מערבבים מצע בסיסי בבקבים מצופים ב-polyol ornithine, כאשר מוסרים את ה-FBS וה-RH FGF basic. תאי גזע עצביים מסוג A GS יתמיינו לכמחצית נוירונים ומחצית אסטרוציטים. הנוירונים יהיו חיוביים ל-T tuj one בתוך 14 עד 21 ימים, כפי שמוצג במיקרוגרף פלואורסצנטי זה.כאן, התאים קובעו ב-4% paraform, aldehyde, והנוירונים זוהו בצבע ירוק. באמצעות נוגדן ראשוני TJ one ונוגדן משני LOR 5 68, כל הגרעינים נצבעו בכחול על ידי הוספת hooks die. היחס בין הנוירונים לסך התאים יהיה בטווח של 40 עד 60%, בהתאם לגיל התרבית.גרף זה מציג את מספר הנוירונים ואת יחסי הנוירונים שהבדילו תאי גזע עצביים מסוג GS ביומיים 16, 19 ו-21 לאחר ההזרקה. לצורך בידול, ניתן להשתמש בנוירונים לניסויים החל מ-12 ימים לאחר ההשתלה ועד לפחות 21 ימים לאחר ההשתלה. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי אופן הכנת נוירונים של סנאי קרקע ארקטי לשימוש בניסויי איסכמיה.

growth-differentiation-adult-hippocampal-arctic-ground-squirrel

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מדגים את תהליך היווצרות הנוירוספרות והתרחבותן מרקמת ההיפוקמפוס. תאי גזע עצביים ותאי אב מרקמת הפיתול המשוננת של העכבר לאחר הלידה מתרבים ויוצרים נוירוספרות ראשוניות, אשר לאחר מכן נזרעות מחדש ליצירת נוירוספרות משניות.

היווצרות והרחבה של נוירוספרות מרקמת היפוקמפוס

תאי גזע עצביים שנקטפו מהמוח הבוגר מתרבים מנוצלים ביישומים החל המחקר הבסיסי של התפתחות מערכת עצבים לחקור יישומים קליניים פוטנציאליים ברפואת רגנרטיבית. זה הופך את השליטה קפדנית בתנאי הבידוד וculturing משמשים לגידול תאים אלה קריטיים להישמע תוצאות ניסוי.

גידול בתאי גזע עצבי מאזורים קונבנציונליים ולא קונבנציונליים של המוח מכרסם מבוגרים

כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט לדור בו זמני של תרביות תאים עצביות מבשר, כמו גם monolayers או neurospheres חסיד, מאזור subventricular וgyrus משוננת של עכברים בוגרים בודדים.

עכבר אחד, שתי תרבויות: בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים למבוגרים משני האזורים העצביים של עכברים בודדים

מאמר וידאו זה מדגים פרוטוקול מקיף לאיתור וכימות של כל שלבי הנוירוגנזה של ההיפוקמפוס במבוגרים באותו קטע רקמה. פיתחנו שיטה להתגבר על המגבלות של אימונופלואורסצנציה מרובה עקיפה המתעוררת כאשר נוגדנים מתאימים ממינים מארחים שונים אינם זמינים.

אימונוהיסטוכימיה ותיוג מרובה עם נוגדנים ממיני Host אותו ללימוד למבוגרים בהיפוקמפוס נוירוגנזה

אנו מדווחים על שיטה מבוססת מיון תאים מופעל פלואורסצנטי (FACS) לבידוד תאי גזע עצביים (NSCs) וצאצאיהם מהאזור התת-חדרי (SVZ) של מוח העכבר הבוגר. מיושם על עכברים טרנסגניים של אינדיקטור מחזור תא פלואורסצנטי (FUCCI), הוא מאפשר לחקור את התקדמות מחזור התא על ידי הדמיה חיה.

מיון תא של תאי גזע ועצביים ממבוגרי עכבר Subventricular האזור וחי-הדמיה של Dynamics תא המחזור שלהם

המוח הכלבי הוא מודל ערך שבו ללמוד neurogenesis למבוגרים. מתפרסמים כאן פרוטוקולים לבידוד והרחבת תאים עצביים מבשרים כלבי מבוגרים בהיפוקמפוס מרקמות המוח עיקריות.

בידוד הרחבת מבשרי עצבית בהיפוקמפוס כלב מבוגר

המטרה של פרוטוקול זה היא לתאר גישה לניתוח התנהגות של מבוגרים בתאי גזע/מחולל קדמון בתגובה לטיפול כימוגנטי של מעגל מקומי ספציפי עצביים.

Assaying בוויסות מעגל ספציפי של היפוקמאל מבוגרים תאים מקודמן עצבי

מוצג כאן הוא פרוטוקול עבור הדור הספונטני של נוירוספירות מועשר בתאי מחולל קדמון בצפיפות גבוהה מצופה נוירונים. במהלך אותו ניסוי, כאשר הנוירונים מצופים בצפיפות נמוכה יותר, הפרוטוקול גם גורם לתרבויות ממושכות של עצב החולדות הראשי.

הדור של נוירוספירות מ מעורב היפוקמאל ראשוני ונוירונים בקליפת המוח מבודדים מ E14-E16 ספראג העובר עכברוש

במאמר זה, אנו מתארים, בפרוטרוט, פרוטוקול עבור הדור של תרבויות נוירוספירה מתאי גזע העכבר הפוסט-לידתיים נגזר של נישות הראשי נוירוגניים העכבר. הנוירוספירות משמשות לזיהוי תאי גזע עצביים מרקמת מוח המאפשרים הערכה של מספרי תאים מקודמי. יתר על כן, אלה מבנים תלת-ממדיים יכול להיות מצופה בתנאים הדיפרנציאל, הענקת הנוירונים, oligodendrocytes הפוך ו astrocytes, המאפשר לימוד של הגורל התא.

בידוד והתרחבות של הנוירוספירות מפוסטנטאל (P1-3) העכבר גומחות נוירוגניים

השתלה של נוירונים GABAergic שמקורם בתאי גזע פלוריפוטנטיים אנושיים שנוצרו על ידי תכנות עצבי יכולה להיות גישה טיפולית פוטנציאלית להפרעות נוירו-התפתחותיות. פרוטוקול זה מתאר את הדור וההשתלה של מבשרים עצביים GABAergic שמקורם בתאי גזע אנושיים במוחם של עכברים ילודים, מה שמאפשר חקירה ארוכת טווח של נוירונים מושתלים והערכת הפוטנציאל הטיפולי שלהם.

השתלת תאי עצב GABAergic שמקורם בתאי גזע אנושיים בהיפוקמפוס העכברים המוקדם לאחר הלידה כדי למתן הפרעות נוירו-התפתחותיות

במאמר זה אנו מתארים מערכת נוקלאופקציה שנועדה לשפר את יעילות העברת הגנים בתאי גזע עצביים מורחבים (NSCs) שבודדו מהאזור התת-חדרי של המורין הבוגר. הממצאים מראים כי שיטה זו משפרת באופן משמעותי את ההפרעה הגנטית בתאי גזע גזעיים, עולה על היעילות של פרוטוקולי טרנספקציה מסורתיים ומשפרת את שיעור הישרדות התאים.

בידוד, התרחבות ונוקלאופקציה של תאי גזע עצביים מאזור תת-חדרי מורין בוגרים

למדו כיצד לזרוע, להרחיב ולהבדיל תאי גזע עצביים מהיפוקמפוס של סנאי ארקטי מבוגרים. שיטה זו מאפשרת לחקור נוירוגנזה ולפתח טיפולים פוטנציאליים לאירועי מוח ולב.

גדילה והתמיינות של מבוגרים בהיפוקמפוס סנאי הארקטי קרקע תאים גזע עצביים

גלה סרטונים נוספים