קביעת מספר נייד במהלך תרבית תאים באמצעות מונה Cell שרביט השלטון

מונה תאי השרביט הוא מכשיר אוטומטי כף יד לספירת תאים, ניטור קוטר ונפח התא, ובדיקת בריאותן ואיכותן של אוכלוסיות תאים. הוא מציע יתרונות משמעותיים על פני שיטות ספירה אחרות, כולל דיוק משופר, קלות שימוש ועלות נמוכה לספירת תאים. באמצעות השרביט, עקוב אחר ההוראות בתצוגה הגרפית שלו כדי לשאוב תאים לתוך החיישן החד פעמי.

לאחר מכן נספרים התאים והמכשיר מדווח על ריכוזי תאים וסטטיסטיקות, שניתן להעלות למחשב ולנתח. היי, אני סוניה. אני מדען חוקר כאן במילפורט, והיום אני הולך להראות לכם כיצד להשתמש בשרביט.

מונה תאים ספירת תאים היא צעד הכרחי אך מייגע לתרבית תאים במבחנה. ריכוזי תאים עקביים מבטיחים שחזור ודיוק ניסיוניים. ספירת תאים חשובה לניטור בריאות התאים וקצב התפשטותם, הערכת תאים בני אלמוות או תאים שזורעים טרנספורמציה לניסויים הבאים, טרנספקציה או זיהום, והכנה לבדיקות מבוססות תאים למרות הצורך במהירות ודיוק.

בספירת תאים, 71% מתוך 400 חוקרים שנסקרו ספרו תאים באמצעות ציטומטר המו. בעוד שהמו ציטומטריה היא זולה, היא מייגעת ונתונה להטיית משתמשים ושימוש לרעה, מה שמביא לספירה לא מדויקת. מקורות השגיאה בהמו ציטומטריה כוללים פיזור תאים לא אחיד בדגימה, יותר מדי או מעט מדי תאים בדגימה.

החלטות סובייקטיביות לגבי האם תא נתון נופל בתוך אזור הספירה המוגדר. זיהום של ההמו ציטומטר, וריאציה של המשתמש וריאציה של קצב מילוי ההמו ציטומטר כדי להקל על השעמום הקשור לספירה ידנית. 29% מהחוקרים סופרים תאים באמצעות מכשירי ספירת תאים אוטומטיים.

עם זאת, עבור רוב החוקרים, המחיר הקשור למכשירים הגדולים הללו מהווה מחסום לשימוש בהם. מונה תאי השרביט הוא מכשיר כף יד אוטומטי המציע אוטומציה ודיוק של ספירת קוטר בעלות נמוכה יחסית בפורמט כף יד קל לשימוש. המערכת משתמשת בעקרון קוטר של גילוי חלקיקים מבוסס עכבה בפורמט ממוזער תוך שימוש בשילוב של חומרה אנלוגית ודיגיטלית לחישה של עיבוד אותות, אחסון נתונים ותצוגה גרפית.

החיישן החד פעמי מתוכנן עם אזור חישת תאים מיקרו מפוברק המאפשר אפליה לפי גודל תא ונפח תא ברזולוציה תת-מיקרונית ותת-פיקוליטר משופרת עם תעלות טיפול מדויקות בנוזלים ואלקטרוניקה. מונה תאי השרביט מציג באופן גרפי סטטיסטיקה של אוכלוסיית התאים כהיסטוגרמה לשימוש. מונה תאי השרביט מתחיל בדילול תרחיף תא בודד של תאים בתמיסת מלח חוצצת פוספט.

ריכוז של 10,000 עד 500,000 תאים למיליליטר הוא אופטימלי. העבר 100 מיקרוליטר של תאים מדוללים לצינור מיקרו-view של 1.5 מיליליטר. הפעל את מונה תאי השרביט על ידי לחיצה ממושכת על המתג הדו-מצבי בגב המכשיר והמתן להופעת ההוראות שעל המסך.

כאשר תתבקש, חבר חיישן לקצה יחידת השרביט כאשר לוח חישת האלקטרודות פונה לכיוון חזית המכשיר. חיישני שרביט מורכבים מתא דגימה יצוק מדויק עם אזור חישה אלקטרוני ואלקטרודות משולבות לחישת תאים. החיישנים מאפשרים להבחין בין גודל התא ברזולוציה תת-מיקרונית ונפח התא ברזולוציה תת-פיקוליטרית.

הנדסת חיישנים עקבית מבטיחה שנפחי דגימה שווים נספרים ומתבצעות מדידות גודל מדויקות. לאחר חיבור החיישן, בצע כל שלב בתהליך הספירה בהתאם להוראות שעל המסך כדלקמן. כאשר המסך קורא, החזק את הבוכנה לחוץ כדי להתחיל ללחוץ על הבוכנה, לאחר מכן המסך יקרא להטביע את החיישן, להטביע את החיישן בתמיסת מתלה התא ולשחרר את הבוכנה כדי לשאוב את מתלה התא לתוך החיישן.

הבוכנה פועלת כאות חשמלי ותמשוך את הדגימה בתוספת נפח מת לתוך החיישן. המהירות או הדיוק של הצלילה לא משנה כמו בפיפטינג. תהליך זה ייקח מספר שניות כשהוא מוכן.

המכשיר יצפצף והדגימה שנטענה תוצג על המסך. לאחר טעינת הדגימה לחיישן, היא נמשכת דרך אזור החישה כדי להעריך את גודל התא ונפח התא. ואז דרך המיקרו-ערוצים, ברגע שסופרים 50 מיקרוליטר של דגימה, החיישן אומר למכשיר להפסיק לספור.

לאחר השלמת הספירה, מסך המכשיר יקרא את הספירה הושלמה. אנא הסר את החיישן והשליך. עקוב אחר ההנחיה והסר והשליך את החיישן.

לאחר מכן המכשיר יציג היסטוגרמה של גודל התא או קוטרו על המסך שלו, כמו גם את ריכוז התאים למיליליטר. לאחר השלמת הספירה וההיסטוגרמה מוצגת על המכשיר, החל שערים על ידי לחיצה על כפתור ההחלפה, בחר שער אוטומטי או השתמש אחרון כדי להגדיר אוטומטית את השער על סמך פרופיל ההיסטוגרמה או להשתמש בשערים מהספירה הקודמת. ללא קשר לבחירה, ניתן להעביר את השערים באופן ידני לקנס.

כוונן את הנתונים, לחץ שוב על לחצן ההחלפה כדי לבחור את השער השמאלי וגלול את המתג כדי להזיז את השער כרצונך. לאחר מכן לחצו שוב על המתג כדי להפעיל את השער הימני וגללו את המתג כדי למקם את השער הימני. לחץ שוב.

יוצגו ריכוז תאים חדש, נפח וקוטר תא ממוצע. המתג יכול להיות גם משני הצדדים כדי להחליף את התצוגה בין תאריך ושעה, גודל תא ממוצע ונפח תא ממוצע עד 72 היסטוגרמות ניתן לאחסן במכשיר עצמו. כדי להעלות את הנתונים למחשב אישי, חבר את המכשיר דרך יציאת כבל ה-USB, במסך התצוגה במחשב.

לחץ פעמיים על יישום תוכנת השרביט כדי להפעיל את התוכנה. לאחר מכן לחץ על התחבר. כל הספירות יועברו אוטומטית לתוכנה.

תוכנת יישום השרביט מציגה את ההיסטוגרמה המפרטת את התפלגות האוכלוסייה של התרבית בנפח או בקוטר. לאחר מכן ניתן לייצא קבצים שהורדו ל-Microsoft Excel, שם הנתונים הגולמיים יוצגו בסלים של קוטר תאים או נפחי תאים שצוינו. 19 קווי תאים שונים הוכנו לספירה וריכוזי התחלה תיאורטיים נקבעו באמצעות מונה קולטר.

תרחיפי תאים אלה דוללו לאחר מכן כדי להשיג תרחיפי תאים בריכוזי תאים תיאורטיים. לאחר מכן נעשה שימוש במונה תאי השרביט לקביעת ריכוזי התאים. איור זה מציג חמישה דילולים שנמדדו עבור חמישה קווי תאים מייצגים יחד עם ריכוז התאים התיאורטי.

מידת הליניאריות הגבוהה, כפי שמצוינת על ידי ערכי r בריבוע, מדגימה כי ספירת שרביטים היא שיטה אמינה עבור קווי התאים שנבדקו על פני טווח פעולה ליניארי רחב. הדיוק היחסי הכולל של ספירת השרביטים מודגם כאן שבו מושווים נתונים המתקבלים מספירת שרביטים לספירות המתקבלות מספירת קוטר. יומן ספירת תאי השרביט משורטט כנגד יומן ספירת השרביטים ומראה כי בכל קווי התאים שנבדקו ספירת השרביטים תואמת את ספירת השרביטים.

ספירה של 19 קווי תאים בוצעה באמצעות מונה Z two coulter. מונה תאי השרביט, מונה אוטומטי מבוסס ראייה, כגון תאי V או מערכת בדיקת ספירה, וספירת המו TER בוצעו על פי הוראות היצרן תוך שימוש באותו תרחיף התחלת תאים ודילולים זהים. התוצאות המוצגות באיור זה מראות כי ריכוזי התאים הנמדדים על ידי ספירת שרביטים תואמים מאוד לריכוזי תאים תיאורטיים עם ליניאריות גבוהה.

מקדם השונות באחוז או CV חושב עבור כל דילול של כל שורת תאים. עבור כל מערכת ספירה המוצגת כאן נמצא האחוז הממוצע של CVS על פני 19 שורות תאים ביחס לריכוז התאים ושיטת הספירה בטווח הפעולה. מונה תאי השרביט מדויק יותר מספירת ציטומטר המו, ומציג סטיות תקן קטנות יותר ומקדמי שונות ממוצעים קטנים יותר.

ספירת השרביטים מהירה פי 10 מציטומטריית המו ומהירה יותר גם ממונים אוטומטיים אחרים. כאן נספרו תאי SF 9, MCF 7 ו-HC 2 93 בשיטות המתוארות בסרטון זה. הזמן הממוצע הנדרש למדידת ריכוז התאים נרשם.

שימו לב שהמו ציטומטריה בוצעה רק פעם אחת לכל דגימה. שרביט מבצע מדידות על סמך גודל התא. לפיכך, ניתן ללכוד כל שינוי במורפולוגיה התאית בהיסטוגרמה.

תרביות בריאות מציגות התפלגות גאוס יפה בצורת פעמון בעוד שתאים לא בריאים כינים וגורמים לשינוי בהיסטוגרמה שמאלה. באופן דומה, כאשר אוכלוסייה של 50% תאים מתים מעורבבת עם 50% תאים חיים, נצפו גם שינויים בהיסטוגרמה. זה עתה הראיתי לכם כיצד להשתמש במונה תאי השרביט החדש למיליפוריות, מה שמחולל מהפכה באופן שבו חוקרים סופרים את התאים שלהם.