Name: קביעת מספר נייד במהלך תרבית תאים באמצעות מונה Cell שרביט השלטון (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 33 s
Description: למדו לספור תאים במהירות ובדייקנות באמצעות מונה Scepter הנייד. מכשיר זה מספק סטטיסטיקות אוכלוסייה, היסטוגרמות וניתוח נפח תאים לתרביות תאים מדויקות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. חשיבותה של ספירת Cell <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת התאים הוא צעד הכרחי אך מייגע עבור התרבות תאים במבחנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריכוזים תא עקבי להבטיח שחזור דיוק ניסיוני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת תאים חשובים לניטור תקינות התא קצב התפשטות, להערכת הנצחה או טרנספורמציה, זריעת תאים transfection, בניסויים הבאים או זיהום, והכנה לקראת מבחני מבוססי תאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> למרות הצורך המהירות והדיוק בספירת התאים, 71% של 400 חוקרים שנסקרו לספור תאים באמצעות hemocytometer. בעוד hemocytometry הוא זול, זה מייגע ובכפוף הטיה משתמש לרעה, שתוצאתה ספירות מדויקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקורות שגיאה hemocytometry כוללים: חלוקת התא אחידות במדגם, יותר מדי או מעט מדי תאים במדגם, החלטות סובייקטיבית, אם תא נתון נופל בתוך השטח שהוגדר הספירה, זיהום hemocytometer, המשתמש אל המשתמש וריאציה ו וריאציה של קצב hemocytometer מילוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להקל על השעמום הקשורים לספור ידני, 29% מכלל החוקרים לספור תאים באמצעות מכשירים אוטומטיים תא הספירה. עם זאת, עבור רוב החוקרים, מחיר הקשורים אלה הספסל העליון מכשירים גדולים היא מחסום להשתמש שלהם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מונה תא שרביט השלטון הוא מכשיר כף יד אוטומטית מציעה אוטומציה הדיוק של הספירה קולטר במחיר נמוך יחסית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המערכת מעסיקה את העיקרון של גילוי קולטר עכבה מבוססי החלקיקים בפורמט מיניאטורי באמצעות שילוב של חומרה אנלוגי ודיגיטלי עבור חישה, עיבוד אותות, אחסון נתונים, וכן תצוגה גרפית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החיישן הפנויה מתוכנן עם אזור microfabricated תא חישה, המאפשרת אפליה לפי גודל התא, נפח תא בבית תת מיקרון ותת picoliter החלטה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> משופרים עם הנוזל טיפול ערוצי דיוק אלקטרוניקה, הדלפק תא שרביט השלטון גרפית מציג האוכלוסייה הסטטיסטיקה תא כמו היסטוגרמה. </li></ol> 2. הכנת מתלה יחיד תא עבור ספירת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להשתמש הדלפק תא שרביט, להתחיל לדלל השעיה תא בודד של תאים, פוספט שנאגרו מלוחים. ריכוז של 10,000-500,000 תאים לכל מ"ל הוא אופטימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העברת 100 μL של תאים בדילול לצינור mL 1.5 microfuge. </li></ol> 3. ביצוע ספירת תאים באמצעות את שרביט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפוך על הדלפק תא שרביט השלטון על ידי לחיצה ארוכה על מתג בצד האחורי של המכשיר ולחכות ההוראות שעל המסך יופיע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר תתבקש, לצרף חיישן לסוף יחידה את שרביט עם פאנל האלקטרודה חישה הפונים לעבר החלק הקדמי של המכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיישנים שרביט מורכב תא יצוק דיוק הדגימה, עם אזור חישה אלקטרוניים משולבים תא חישה אלקטרודות. החיישנים מאפשרים להפלות גודל התא בכל תת מיקרון רזולוציה, נפח תא ברזולוציה משנה picoliter. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנדסה חיישן עקבי, מבטיח כרכים מדגם שווה נספרים מדידות גודל מדויק נעשים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר החיישן מחוברת, לבצע כל שלב של תהליך ספירת על פי ההוראות המופיעות על המסך כדלקמן: </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר המסך קורא "החזק את הבוכנה להתחיל," לוחץ על המתג. המסך אז יהיה לקרוא "להטביע את החיישן." להטביע את החיישן לתוך הפתרון ההשעיה התא ולשחרר את הבוכנה כדי לשאוב את ההשעיה התא לתוך החיישן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הבוכנה משמשת האות החשמלי ו ימשוך את המדגם בתוספת נפח מת לתוך החיישן. המהירות או הדיוק של צולל לא משנה כפי שהיא עושה עם pipetting. תהליך זה יקח כמה שניות. כאשר מוכן, המכשיר יצפצף, ו "לדוגמה טעון" יוצג על המסך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר המדגם הוא נטען לתוך החיישן הוא נמשך דרך אזור חישה להעריך גודל התא ונפח תא, אז דרך microchannels. לאחר 50 μL המדגם נספר חיישן מספרת את המכשיר כדי להפסיק לספור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ספירת תושלם, המסך של המכשיר יקרא "הרוזן השלם. הסר חיישן וזורקים". בצע את הפקודה, ולהסיר ולסלק את החיישן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המכשיר לאחר מכן להציג היסטוגרמה של גודל התא או קוטר על המסך שלה, כמו גם את ריכוז התאים לכל מ"ל. </li></ol> 4. ניתוח נתונים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר הספירה הוא להשלים את ההיסטוגרמה מוצגת על המכשיר, להחיל השערים על ידי לחיצת כפתור לעבור. בחר "gating אוטומטי" או "שימוש אחרון" או כדי להגדיר באופן אוטומטי את השער מבוסס על הפרופיל היסטוגרמה, או להשתמש השערים מהסכום הקודם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בלי קשר הבחירה, השערים ניתן להעביר באופן ידני כדי לכוונן את הנתונים. לחצו על הכפתור לעבור שוב כדי לבחור את השער השמאלי כדי לגלולggle לעבור את השער כרצונכם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ואז ללחוץ על לעבור שוב כדי להפעיל את השער הנכון המגילה לעבור למקום את השער הנכון. לחץ שוב; תא חדש הריכוז הממוצע נפח תא בקוטר יוצג. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתן גם לעבור לגור צד להחליף את התצוגה בין התאריך, השעה, כלומר גודל התא, כלומר נפח התא. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עד 72 היסטוגרמות יכול להיות מאוחסן על המכשיר עצמו. כדי להעלות את הנתונים למחשב אישי, לצרף את המכשיר דרך יציאת כבל ה-USB על מסך התצוגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במחשב, לחיצה כפולה על יישום התוכנה שרביט השלטון כדי להפעיל את התוכנה ואז ללחוץ על "חיבור". ספירת הכל באופן אוטומטי יציאת התוכנה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תוכנת היישום מציג את שרביט השלטון היסטוגרמה המפרט את התפלגות האוכלוסייה של התרבות בנפח או קוטר. קבצים שהורדו לאחר מכן ניתן לייצא ל-Microsoft Excel, שם את הנתונים הגולמיים יוצג פחי בקטרים ​​של התא שצוין או אמצעי אחסון נייד. </li></ol> 5. נציג תוצאות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תשע עשרה שורות תאים שונות מוכנים לספור ריכוזי החל תיאורטי נקבעו באמצעות מונה קולטר. המתלים האלה התא היו אז מדולל יותר כדי להשיג השעיות התא בריכוזים התא התיאורטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נגד התא שרביט השלטון היה אז בשימוש כדי לקבוע ריכוזי התא. איור 1 מציג 5 דילולים כי נמדדו 5 שורות תאים נציג יחד עם ריכוז התא התיאורטי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> רמה גבוהה של ליניאריות כפי שצוין על ידי ערכי R2, מוכיח כי ספירת שרביט השלטון היא שיטה אמינה של שורות תאים שנבדקו, על פני מגוון רחב ההפעלה ליניארי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הדיוק היחסי הכולל של ספירת שרביט השלטון לידי ביטוי באיור 2, שבו נתונים המתקבלים ספירת שרביט השלטון מושווים עם ספירת המתקבל ספירת קולטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יומן של ספירת שרביט השלטון התא זממו נגד ביומן של ספירת קולטר, מראה כי, בכל שורות תאים שנבדקו, ספירת שרביט השלטון להתאים ספירת קולטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת של 19 שורות תאים בוצעו באמצעות קולטר Z2 מונה, המונה תא שרביט, מונה מבוסס חזון אוטומטי כגון סלולרי וי או מערכת אינספור, וגם hemocytemeter. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת בוצעו על פי הוראות היצרן, תוך שימוש באותו התא החל ההשעיה ו דילולים זהה. התוצאות באיור 3 מראות כי ריכוז התאים נמדד על ידי ספירת שרביט השלטון מקרוב להתאים ריכוזי תא תיאורטי עם ליניאריות גבוהה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מקדם אחוז וריאציה, או קורות חיים, חושבה עבור כל דילול של כל שורה תא עבור כל מערכת הספירה. איור 4 מראה את קורות% בממוצע על פני 19 שורות תאים ביחס ריכוז התא שיטת הספירה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בטווח ההפעלה, הדלפק תא שרביט השלטון מדויקת יותר לספור hemocytometer מבוסס חזון, הצגת סטיות תקן קטנות מקדמי הממוצע קטן יותר של וריאציה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספירת שרביט פי עשרה מהר יותר ומהר יותר hemocytometry דלפקי אוטומטיות אחרות. ב איור 5, SF9, MCF7, ו HEK293 תאים נספרו בשיטות המתוארות וידאו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזמן הממוצע הנדרש כדי למדוד את ריכוז התאים נרשם. שים לב hemocytometry בוצע פעם אחת בלבד לכל המדגם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שרביט עושה מדידות על בסיס גודל התא. לפיכך שינויים במורפולוגיה הסלולר ניתן ללכוד בהיסטוגרמה. תרבויות בריא להציג פעמון גאוס נחמד בצורת ההפצה, בעוד תאים בריאים, lyse, ולגרום לשינוי בהיסטוגרמה שמאלה (איור 6, פאנל משמאל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באופן דומה, כאשר אוכלוסיה של תאים מתים 50% היו מעורבים עם תאים חיים 50%, משמרות היסטוגרמה נצפו גם (איור 6, פאנל מימין). </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig1.jpg" alt="איור 1"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig2.jpg" alt="איור 2"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig3.jpg" alt="איור 3"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig4.jpg" alt="איור 4"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig5.jpg" alt="איור 5"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig6.jpg" alt="איור 6"><img src="/files/ftp_upload/2204/2204fig7.jpg" alt="איור 7">

<ol><li>Barghshoon, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarghshoon%2C+S+%22Cell+Counting+Survey%22">Cell Counting Survey</a>. , Millipore. (2009).</li>
<li>Tucker, K. G., Chalder, S., al-Rubeai, M., Thomas, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+hybridoma+cell+number%2C+viability%2C+and+morphology+using+fully+automated+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Enzyme+Microb+Technol%22%5BJournal%5D)">Measurement of hybridoma cell number, viability, and morphology using fully automated image analysis.</a> Enzyme Microb Technol. 16 (1), 29-35 (1994).</li>
<li>Houwen, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHouwen%2C+B+%22Fifty+years+of+hematology+innovation%3A+the+Coulter+principle%22">Fifty years of hematology innovation: the Coulter principle</a>. , Medical Laboratory Observer. (2003).</li>
</ol>

קתלין Ongena, Chandreyee דאס, ג&#39;נט ל סמית, סוניה גיל, ו גרייס ג&#39;ונסטון מועסקים על ידי Millipore, אשר מייצר את המכשירים המשמשים במאמר זה.

השוואת הביצועים של הדלפק תא שרביט השלטון על תוצאות שיטות ספירה אחרות, אנו מסיקים כי הנגד החדש כף יד, תא אוטומטי מספקת ספירת תא מדויק, מהיר, אמין על פני טווח רחב ההפעלה. הפונקציונליות של ספירת שרביט השלטון היא תוצאה של הטכנולוגיה דיוק מהונדסים מוטבע קצה החיישן ואת מכשור מתוחכם ספירת המבוסס על העיקרון קולטר. איכות הביצועים עולה שרביט השלטון בספירת כשיטה כדי להגדיל את המהירות ולשפר את שחזור של תא המבוססת על מבחני. הפורמט מאפשר שעמום כף יד ימין ספירה מהירה חינם למכסה המנוע תרבית תאים.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> חומר שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערה </td></tr><tr><td> שרביט 2.0 מונה כף יד סלולריים אוטומטי עם 40 חיישנים שרביט השלטון מיקרומטר </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20040 </td><td></td></tr><tr><td> שרביט 2.0 מונה כף יד סלולריים אוטומטי עם 60 חיישנים שרביט השלטון מיקרומטר </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC20060 </td><td></td></tr><tr><td> שרביט חיישנים, 60 מיקרומטר </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC60050 </td><td> 50 חבילות של חיישנים </td></tr><tr><td> שרביט חיישנים, 40 מיקרומטר </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCC40050 </td><td> 50 חבילות של חיישנים </td></tr><tr><td> מתאם מתח אוניברסלי </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCPOWER </td><td> </td></tr><tr><td> שרביט O-Ring Kit </td><td> EMD Millipore </td><td> PHCCOCLIP </td><td> 2 טבעות אטימה ואחד לכסות מסנן </td></tr></tbody></table>

קביעת מספר נייד במהלך תרבית תאים באמצעות מונה cell שרביט השלטון

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

ספירת התאים לרוב צעד הכרחי אך מייגע על התרבות תאים במבחנה. ריכוזים תא עקבי להבטיח שחזור דיוק ניסיוני. ספירת תאים חשובים לניטור תקינות התא קצב התפשטות, להערכת הנצחה או טרנספורמציה, זריעת תאים transfection, בניסויים הבאים או זיהום, והכנה לקראת מבחני מבוססי תאים. חשוב כי ספירת התאים להיות מדויק, עקבי, ומהר, במיוחד עבור מדידות כמותיות של התגובות הסלולר. למרות הצורך הזה המהירות והדיוק בספירת התאים, 71% מכלל 400 חוקרים שנסקרו 1 אשר לספור תאים באמצעות hemocytometer. בעוד hemocytometry הוא זול, זה מייגע ובכפוף הטיה משתמש לרעה, שתוצאתה ספירות מדויקות. Hemocytometers עשויים זכוכית אופטית מיוחדת אשר השעיות תא נטענים בכמויות שצוינו וספר תחת מיקרוסקופ. מקורות שגיאות hemocytometry כוללים: חלוקת התא אחידות במדגם, יותר מדי או מעט מדי תאים במדגם, החלטות סובייקטיבית, אם תא נתון נופל בתוך השטח שהוגדר הספירה, זיהום hemocytometer, המשתמש אל המשתמש וריאציה ו וריאציה של hemocytometer מילוי שיעור 2. כדי להקל על השעמום הקשורים לספור ידני, 29% מכלל החוקרים לספור תאים באמצעות תא ספירה אוטומטיות התקנים; אלה כוללות מבוססות ראיה דלפקים, מערכות לזהות תאים באמצעות עקרון קולטר, או cytometry זרימה 1. עבור רוב החוקרים, המכשול העיקרי באמצעות מערכת אוטומטית הוא המחיר הקשורים benchtop אלה מכשירים גדולים 1. מונה תא שרביט השלטון הוא מכשיר כף יד אוטומטית מציעה אוטומציה הדיוק של הספירה קולטר במחיר נמוך יחסית. המערכת מעסיקה את העיקרון של גילוי קולטר עכבה מבוססי החלקיקים 3 בפורמט מיניאטורי באמצעות שילוב של חומרה אנלוגי ודיגיטלי עבור חישה, עיבוד אותות, אחסון נתונים, תצוגה גרפית. טיפ הפנויה מתוכנן עם אזור microfabricated תא חישה, המאפשר אפליה על ידי גודל התא ונפח התא תת מיקרון ותת picoliter החלטה. משופרים עם הנוזל טיפול ערוצי דיוק אלקטרוניקה, הדלפק תא שרביט השלטון דוחות האוכלוסייה תא הסטטיסטיקה מוצגים בצורה גרפית כמו היסטוגרמה.

מונה Cell שרביט השלטון הוא מכשיר כף יד אוטומטיים שניתן להשתמש בהם כדי לספור תאים, צג בקוטר של התא נפח לשמש כדי לבדוק את בריאות ואיכות הסלולר אוכלוסיות מתרבות אחת לאחרת.

קביעת מספר נייד במהלך תרבית תאים באמצעות מונה Cell שרביט השלטון

ספירת תאים היא לרוב שלב נחוץ אך מייגע בתרביות תאים חוץ גופיות (in vitro). ריכוזי תאים עקביים מבטיחים הדירות ניסויית ו...

סופר התאים scepter הוא מכשיר אוטומטי נייד לספירת תאים, ניטור קוטר ונפח התאים, ובדיקת הבריאות והאיכות של אוכלוסיות תאיות. הוא מציע יתרונות משמעותיים על פני שיטות ספירה אחרות, כולל דיוק משופר, קלות שימוש ועלות נמוכה לספירת תאים. בעת השימוש ב-scepter, יש לעקוב אחר ההוראות המופיעות על התצוגה הגרפית שלו כדי לשאוב את התאים אל החיישן החד-פעמי.לאחר מכן סופרים את התאים והמכשיר מדווח על ריכוזי התאים ועל נתונים סטטיסטיים, אותם ניתן להעלות למחשב ולנתח. שלום, אני סוניה. אני מדענית מחקר כאן ב-Millport, והיום אראה לכם כיצד להשתמש ב-scepter.ספירת תאים היא שלב הכרחי אך מייגע בתרביות תאים in vitro. ריכוזים עקביים של תאים מבטיחים הדירות ודיוק ניסיוניים. ספירת תאים חשובה לניטור בריאות התאים וקצב השכפול, להערכת תאים אלמוותיים או שעברו טרנספורמציה, לזריעת תאים עבור ניסויים עוקבים, לטרנספקציה או להדבקה, ולהכנה לבדיקות מבוססות תאים, וכל זאת תוך צורך במהירות ובדיוק.בספירת תאים, 71% מתוך 400 חוקרים שנסקרו סופרים תאים באמצעות המוציטומטר (hemo cytometer). למרות שהמוציטומטריה היא זולה, היא רשומית ומסועבת וחשופה להטיות משתמש ולשימוש שגוי, מה שמוביל לספירות לא מדויקות. מקורות השגיאה בהמוציטומטריה כוללים פיזור תאים לא אחיד בדגימה, או מספר רב או מועט מדי של תאים בדגימה.החלטות סובייקטיביות לגבי השאלה האם תא מסוים נמצא בתוך אזור הספירה המוגדר. זיהום של ההמו-ציטומטר, שונות בין משתמשים ושונות בקצב מילוי ההמו-ציטומטר כדי להקל על השעמום הקשור לספירה ידנית. 29% מהחוקרים סופרים תאים באמצעות מכשירים אוטומטיים לספירת תאים.עם זאת, עבור רוב החוקרים, המחיר הנלווה למכשירים גדולים אלו המונחים על שולחן המעבדה מהווה מחסום לשימוש בהם. סופר התאים Scepter הוא מכשיר ידני אוטומטי המציע את האוטומציה והדיוק של ספירת Coulter בעלות נמוכה יחסית ובפורמט ידני קל לשימוש. המערכת מיישמת את עיקרון ה-Coulter לגילוי חלקיקים המבוסס על עכבה (impedance) בפורמט ממוזער, תוך שימוש בשילוב של חומרה אנלוגית ודיגיטלית לעיבוד אותי חישוש, אחסון נתונים ותצוגה גרפית.החיישן החד-פעמי תוכנן עם אזור חישוב תאים המיוצר במיקרו-פבריקציה, המאפשר הבחנה לפי גודל תא ונפח תא ברזולוציה של סאב-מיקרון וסאב-פיקוליטר, עם שיפור באמצעות ערוצי טיפול בנוזלים ואלקטרוניקה מדויקים. מונה התאים scepter מציג גרפית את הסטטיסטיקה של אוכלוסיית התאים כהיסטוגרמה לשימוש. תהליך הספירה במונה התאים scepter מתחיל בדילול של תליה של תאים בודדים בתוך phosphate buffered saline.ריכוז של 10,000 עד 500,000 תאים למיליליטר הוא האופטימלי. העבירו 100 µL של תאים מדוללים לשפפור microview בנפח 1.5 מיליליטר. הדליקו את סופר התאים scepter על ידי לחיצה ממושכת על המתג בגב המכשיר והמתינו להופעת ההוראות על המסך.כאשר תתבקש, חבר חיישן לקצה יחידת ה-scepter, כאשר פאנל חישוף האלקטרודות פונה לכיוון חזית המכשיר. חיישני scepter מורכבים מתא דגימה המיוצר בדיוק גבוה, עם אזור חישוף אלקטרוני ואלקטרודות חישוף תאים מובנות. החיישנים מאפשרים להבחין בין גדלי תאים ברזולוציה סוב-מיקרונית ובין נפחי תאים ברזולוציה סוב-פיקוליטרית.הנדסת חיישנים עקבית מבטיחה שסכמי דגימות שווים ייספרו ומדידות גודל מדויקות יבוצעו. לאחר חיבור החיישן, בצע כל שלב בתהליך הספירה בהתאם להוראות המופיעות על המסך באופן הבא. כאשר על המסך יופיע "החזק את הבוכנה כדי להתחיל" (hold down the plunger to begin), לחץ על הבוכנה; לאחר מכן יופיע על המסך "טבול את החיישן" (submerge the sensor), טבול את החיישן לתוך תמיסת תרחיף התאים, ושחרר את הבוכנה כדי לשאוב את תרחיף התאים אל תוך החיישן.הבוכנה משמשת כאות חשמלי ותשאב את הדגימה בתוספת הנפח המת בתוך החיישן. מהירות או דיוק הלחיצה אינם משפיעים, בניגוד למה שקורה בעת פיפטור. תהליך זה יימשך מספר שניות כאשר הוא יהיה מוכן.המכשיר ישמיע צליל וההודעה "sample loaded" תוצג על המסך. ברגע שהדגימה נטענת אל החיישן, היא נמשכת דרך אזור החשיפה להערכת גודל התא ונפח התא. לאחר מכן, דרך המיקרו-ערוצים, ברגע שנספרות 50 µL של דגימה, החיישן מאותת למכשיר להפסיק את הספירה.לאחר השלמת הספירה, על מסך המכשיר תופיע ההודעה count complete. אנא הוציאו את החיישן והשליכו אותו. פעלו לפי ההנחיה, הוציאו והשליכו את החיישן.המכשיר יציג לאחר מכן על מסכו היסטוגרמה של גודל התאים או קוטרם, וכן את ריכוז התאים למיליליטר. לאחר השלמת הספירה והצגת ההיסטוגרמה במכשיר, יש להחיל שערים (gates) על ידי לחיצה על כפתור הבחירה, ולבחור ב-auto gating או ב-use last כדי לקבוע את השער באופן אוטומטי על סמך פרופיל ההיסטוגרמה או להשתמש בשערים מהספירה הקודמת. ללא קשר לבחירה, ניתן להזיז את השערים ידנית לצורך כיוונון עדין.כוון את הנתונים, לחץ שוב על כפתור הבחירה (toggle) כדי לבחור את השער השמאלי והזז את כפתור הבחירה כדי להזיז את השער כרצונך. לאחר מכן, לחץ שוב על כפתור הבחירה כדי להפעיל את השער הימני והזז את כפתור הבחירה כדי למקם את השער הימני. לחץ שוב.יוצגו ריכוז תאים חדש, נפח תא ממוצע וקוטר. ניתן להשתמש במתג כדי להחליף את התצוגה בין התאריך והשעה, גודל התא הממוצע ונפח התא הממוצע; ניתן לשמור עד 72 היסטוגרמות במכשיר עצמו. כדי להעלות את הנתונים למחשב אישי, חברו את המכשיר דרך יציאת כבל ה-USB, וסימני הנתונים יופיעו על מסך התצוגה במחשב.לחצו לחיצה כפולה על אפליקציית התוכנה scepter כדי להפעיל אותה. לאחר מכן, לחצו על connect. כל הספירות יועברו באופן אוטומטי לתוכנה.תוכנת היישום scepter מציגה את ההיסטוגרמה המפרטת את התפלגות האוכלוסייה של התרבית לפי נפח או קוטר. ניתן לייצא את הקבצים שהורדו ל-Microsoft Excel, שם יוצגו הנתונים הגולמיים בקטגוריות (bins) של קוטרי תאים או נפחי תאים מוגדרים. 19 קווי תאים שונים הוכנו לספירה, וריכוזי התחלה תיאורטיים נקבעו באמצעות מונה תאים.תלsuspensions של תאים אלו דוללו לאחר מכן כדי לקבל תלsuspensions של תאים בריכוזי תאים תאורטיים. לאחר מכן נעשה שימוש במספר תאים מסוג scepter כדי לקבוע את ריכוזי התאים. איור זה מציג חמשה דילולים שנמדדו עבור חמישה קווי תאים מייצגים, לצד ריכוז התאים התאורטי.המידה הגבוהה של הלינאריות, כפי שמעידים ערכי ה-r-squared, מוכיחה כי ספירה באמצעות scepter היא שיטה מהימנה עבור שורות התאים שנבדקו בטווח פעולה לינארי רחב. הדיוק היחסי הכולל של ספירת scepter מוצג כאן, כאשר נתונים שהתקבלו מספירת scepter מושווים לספירות שהתקבלו מספירת coter. הלוגריתם של ספירות התאים ב-scepter מוצג אל מול הלוגריתם של ספירות ה-coter, ומראה כי בכל שורות התאים שנבדקו, ספירות ה-scepter תואמות לספירות ה-coter.ספירה של 19 קווי תאים בוצעה באמצעות מונה תאים Z two coulter. ספירת תאים באמצעות scepter, מונה אוטומטי מבוסס ראייה, כגון מערכת V cell או count test, וספירת hemo TER בוצעו על פי הוראות היצרן תוך שימוש באותה סספנסיית תאים התחלתית ובדילולים זהים. התוצאות המוצגות בדמות זו מדגימות כי ריכוזי התאים שנמדדו באמצעות ספירת scepter תואמים באופן הדוק לריכוזי התאים התאורטיים עם ליניאריות גבוהה.מקדם השונות באחוזים (CV) חושב עבור כל דילול של כל סוג תא. עבור כל אחת ממערכות הספירה המוצגות כאן, מופיעים מקדמי השונות הממוצעים באחוזים על פני 19 סוגי תאים, ביחס לריכוז התאים ולשיטת הספירה בתוך טווח העבודה. מונה התאים Scepter מדויק יותר מספירה באמצעות המוציטומטר (hemo cytometer), ומציג סטיות תקן קטנות יותר ומקדמי שונות ממוצעים קטנים יותר.ספירה באמצעות Scepter מהירה פי 10 מאשר ציטומטריית דם ומהירה יותר גם ממספרי תאים אוטומטיים אחרים. כאן נספרו תאי SF nine, MCF seven ו-HC 2 93 באמצעות השיטות המתוארות בסרטון זה. נרשם הזמן הממוצע שנדרש למדידת ריכוז התאים.שימו לב כי ספירת תאי דם בוצעה פעם אחת בלבד לכל דגימה. מכשיר ה-Scepter מבצע מדידות המבוססות על גודל התאים. לפיכך, ניתן לזהות כל שינוי במורפולוגיה התאית בהיסטוגרמה.תרביות בריאות מציגות התפלגות גאוסיאנית יפה בצורת פעמון, בעוד שתאים לא בריאים מתים וגורמים להסטה של ההיסטוגרמה שמאלה. באופן דומה, כאשר אוכלוסייה של 50% תאים מתים עורבבה עם 50% תאים חיים, נצפו גם הן הסטות בהיסטוגרמה. הרגשתי להראות לכם כיצד להשתמש במונה התאים Scepter החדש של Millipore, אשר מחולל מהפכה בדרך שבה חוקרים סופרים את התאים שלהם.

determining-cell-number-during-cell-culture-using-scepter-cell

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ידיעת מספרם המדויק של תאים קיימא נדרש מניפולציות תרבות רבים רקמות. פרוטוקול זה מתאר כיצד להבדיל בין תאים חיים ומתים ולכמת תאים באמצעות hemacytometer. למרות שזה מתאר הספירה האנושית גזע עצביים / מבשר תאים (hNSPCs), ניתן להשתמש בו עבור סוגי תאים אחרים.

ספירת אדם בתאי גזע עצביים

קביעת מספר התאים בתרבית חשוב סטנדרטיזציה של תנאים התרבות בביצוע ניסויים quantitation מדויק. בסרטון זה אנו מדגימים כיצד תאים נספרים באמצעות hemacytometer.

ספירת ועל קביעת הכדאיות של תאים בתרבית

Z Moxi נגד מיניאטורי תא אוטומטי הוא כלי רומן המשלב עקרון קולטר עם הטכנולוגיה סרט דק פטנט חיישן אלגוריתם תוכנה קניינית לבצע שינוי גודל ועוד היד נטויה של מגוון רחב של גודל החלקיקים, כמו גם כדי לקבוע את הבריאות הכללית של monodisperse תא תרבויות יונקים. פרוטוקול זה מתאר את השימוש בכלי זה לספור ולהעריך את הבריאות של תרביות תאים.

קביעת ספירת תאים יונקים, גודל התא ובריאות נייד באמצעות ת Moxi מיני מונה אוטומטי Cell

פרוטוקול זה מתאר את השימוש בשלוש שיטות שונות לניתוח התפשטות תאים בשורות תאים של סרטן השד. זה כולל שימוש בספירת תאים קונבנציונלית, כדאיות תאים מבוססת זוהר וספירת תאים באמצעות הדמיית תאים. כל אחד מהם מציע יתרונות למדידה הניתנת לשחזור של התפשטות התאים.

השוואה של שלוש שיטות שונות לקביעת שגשוג תאים בשורות תאי סרטן השד

מאמר זה מתאר את הכימות של מיקרוגרפים המוציטומטריים והנדידה/פלישה באמצעות שני תוספים חדשים של ImageJ בקוד פתוח, מחשבון ריכוז תאים ומונה בדיקת הגירה.  יתר על כן, הוא מתאר פרוטוקולי קליטת וכיול תמונה וכן דן בפירוט בדרישות הקלט של התוספים.

כימותים אוטומטיים וניתוח הליכי ספירה הניידת באמצעות תוספי ImageJ

לעתים קרובות יש צורך להעריך את הרעילות הפוטנציאלית של מערכת תרכובות על תאים מתורבתים. כאן, אנו מתארים אסטרטגיה למסך מהימן עבור תרכובות רעילות בפורמט 96-היטב.

אסטרטגיה לזיהוי תרכובות המשפיעות על צמיחת תאים והישרדות בתאי מיונקים מתורבתים בתפוקה נמוכה לבינונית

הצלבה בין תאי אפיתל חלביים לתאי אנדותל תורמת חשובה להתקדמות סרטן השד, לצמיחת הגידול ולגרורות. במחקר זה, כדוריות נעשו מתאי סרטן השד יחד עם תאי אנדותל כלי דם ו/או לימפתיים ולהדגים את ישימותם כמערכת במבחנה לחקר סרטן השד.

כדורי תא אפיתל ואנדותל של חלבי כמודל הפריה תפקודי פוטנציאלי לחקר סרטן השד

פרוטוקול זה מספק הנחיה מקיפה להגדרה ולניטור כמותי של תרביות משותפות, כולל ציאנובקטריה מפרישת סוכר פוטו-אוטוטרופיים ושמרים הטרוטרופיים.

הרכבה וכימות של תרביות משותפות המשלבות שמרים הטרוטרופיים עם ציאנובקטריה מפרישת סוכר פוטוטרופית

מאמר זה מתאר פרוטוקול לאפיון מכני של ספרואידים חיים בתוך מטריצה תלת-ממדית באמצעות מיקרוספקטרוסקופיית ברילואין. שיטה אופטית מלאה זו מאפשרת ויזואליזציה ספרואידית ברזולוציה מיקרוסקאלית ותכונות מכניות כמותיות. גישה זו משפיעה על פנוטיפינג מכני; לדוגמה, קביעת מצבים פתולוגיים של ספרואידים גידוליים בתוך מיקרו-סביבה תלת-ממדית.

מיפוי מכני של ספרואידים באמצעות ספקטרוסקופיית ברילואין

יש צורך קריטי במודלים תלת מימדיים של סרטן הלוכדים הצלבה הטרו-תאית כדי לחקור גרורות סרטניות. המחקר שלנו מציג את הדור של הטרו-אפיתל סטרומלטי-תאי בסביבה נטולת פיגומים ופיגומים שניתן להשתמש בהם לחקר פלישה והתפלגות מרחבית תאית.

תאי סטרומה הטרו-תאיים בתרביות תלת מימד ללא פיגומים של תאי סרטן אפיתל כדי להניע פלישה

למדו לספור תאים במהירות ובדייקנות באמצעות מונה Scepter הנייד. מכשיר זה מספק סטטיסטיקות אוכלוסייה, היסטוגרמות וניתוח נפח תאים לתרביות תאים מדויקות.

קביעת מספר נייד במהלך תרבית תאים באמצעות מונה Cell שרביט השלטון

גלה סרטונים נוספים