Name: פרוטוקול לגידול יתושים (א gambiae) (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T01:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 3 s
Description: למדו את שיטות הגידול של יתושי Anopheles gambiae במעבדה, כולל שליטה בטמפרטורה, לחות ומחזור אור. הפרוטוקול מדגים טיפוח בכל שלבי החיים לצורך מחקר מלריה ושליטה בנשאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

יתוש מזון: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזון: מזון דגים מוארק (Aquaricare). קמצוץ קטן צריך להיות הוסיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזון ב &#39;: מקורקע מזון CAT (פורינה). קמצוץ קטן צריך להיות הוסיף. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזון C: חתול מזון (פורינה). שתי טבליות צריך להיות הוסיף. </li></ol> דם: בעלי חיים או דם אדם יכול לשמש יתושים האחורי. דם טרי נאסף עם מזרק ולשים צינור סטרילי פלקון 15 מ&quot;ל המכיל 1ml של עלות לכל יום (נוגד קרישה) עבור כל 10 מ&quot;ל של דם, ואז מערבבים אותו בעדינות centrifuged בטמפרטורת החדר ב 2000 סל&quot;ד במשך 5 דקות. Supernatant נמחקת, מקפיד להסיר את המעיל באפי המהווה כדוריות דם אחרים (למשל, WBC). גלולה RBC מושעה אז pipetting בנפח שווה של המדיום RPMI, ורחץ נוספת זה שלוש פעמים בינוני. לאחר לשטוף הסופי, RBCs pelleted הם resuspended בנפח שווה של המדיום RPMI ומאוחסן על 4 ° C (אפשר לשמור על 80-10 ימים). ממש לפני האכילה, RBC (ב RPMI) הוא centrifuged (2000 סל&quot;ד במשך 5 דקות) כדי גלולה את התאים, ואת RBC ארז הוא resuspended בסרום (O + אדם נסיוב) להשיג המטוקריט 40%. הדם חייב להישמר על 37 ° C תמיד להזנת. יום 1: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 3-5 הישן יום הנקבה הבוגרת יתושים ניזונים על דם להטיל ביצים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזנת דם, קרום מלאכותי (parafilm) שיטת האכלה משמש כדלקמן: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדוריות דם אדומות (ראה לעיל להכנת דם) מעורבבים עם סרום חום מומת להשיג המטוקריט ~ 40% (ארז RBC 40% ו% בסרום 60). זה מתווסף מזין את הזכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מזין מחוברת חם מים ז&#39;קט (37 ° C), והניח על הכלוב כדי לאפשר גישה יתושים על פני השטח קרום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יתושים מותר להאכיל עבור ~ 30 דקות. </li></ol></li></ol> יום 3: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנקבות יטילו את הביצים יומיים אחרי שהם ניזונים מדם. נייר מסנן קטן עטוף צורה חרוטית היא לשים כוס קטן המכיל מים מזוקקים, ולוודא כי נייר לסנן מקבל לחות. כוס נשמרת בתוך כלוב למשך הלילה היתושים להטיל ביצים. </li></ol> יום 4: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העיתון המכיל מסנן את הביצים יתוש ממוקם מגש פלסטיק עם מים ~ 300 מ&quot;ל מזוקקים. קמצוץ של מזון מתווסף מגש ביצים מותר בוקעים זחלים במהלך הימים הקרובים. </li></ol> ימים 5-8: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גידול הזחלים ניזונים כל יום עם שתי טבליות של מזון C, פיקוח על צפיפות האוכלוסייה. ביום השמיני (זחלים בן 5 ביום), אוכלוסיית הזחלים הוא מדולל ממגש 1 ל ~ 10 מגשים, עם קמצוץ של מזון ושתי טבליות של C אוכל כל מגש. (~ 30 דקות) </li></ol> ימים 9 - 12: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזחלים ניזונים בכל יום עם אוכל ג ביום ה -12 (9 הזחלים יום הישן), המים משתנה עם מים טריים, מזון נוסף (קמצוץ מזון B ושתי טבליות של מזון C). גלמים מתחיל לפתח בשלב זה. מגשים מכוסים רשתות כדי למנוע בריחה של מבוגרים. (~ 80-10 דקות) </li></ol> יום 13 - 15: גלמים מותר לצאת למבוגרים של 2 הבא - 3 ימים. מזון הוא נתון בכל יום זחלים / גלמים בקפידה על ידי הסרת נטו כדי למנוע בריחה של מבוגרים. יום 16: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המבוגרים נאספים לכלוב דרך aspirator מחובר ואקום. כלוב מורכב של בקבוק 100 מ&quot;ל קטן עם פתיל כותנה כי היא ספוגה סוכרוז 10% (autoclaved) ו מגבת נייר רירית בתחתית לספוג כל נשפך סוכר פוטנציאליים אשר עשויים להתרחש במהלך טיפול בכלוב. (~ 30-40 דקות) </li></ol> יום 17-21: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המבוגרים (גם זכרים ונקבות) נשמרים אז בחדר insectary 4-5 ימים, שניזון סוכרוז 10% לפני שהם שוב דם-fed כדי להתחיל את המחזור הבא. יתושים אותו ניתן להשתמש בו כדי להטיל ביצים יותר מפעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יתושים כי אין צורך בניסויים או גידול יכול להיות נהרג על ידי הצבת כלוב במקפיא. מגשי משומשים כלובים יש לנקות מיובשים לפני שניתן יהיה להשתמש בהם שוב. </li></ol> הערה: לא יכול להיות כמה וריאציות בשיטת גידול יתושים מעבדות שונות ייתכן בטכניקות שונות.

<ol><li>Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji,, Wicaksana, B. P., Boewono, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colonization+of+Anopheles+maculatus+from+Central+Java%2C+Indonesia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia.</a> J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).</li>
<li>Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+rearing+techniques+and+adult+life+table+parameters+for+Anopheles+sergentii+from+Egypt%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt.</a> J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).</li>
<li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBenedict%2C+MQ+%22Care+and+maintenance+of+anopheline+mosquitoes%2C+The+molecular+biology+of+disease+vectors%3A+A+methods+manual%22">Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual</a>. Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. , Champman & Hall. London. 3-12 (1997).</li>
<li>Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rearing+of+Anopheles+quadrimaculatus+Say+and+Aedes+aegypti+%28L.%29+in+the+laboratory%5BTitle%5D)+AND+%22Mosq+News%22%5BJournal%5D)">Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory.</a> Mosq News. 9, 112-117 (1949).</li>
<li>Merritt, R. W., Dadd, R. H., Walker, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feeding+behavior%2C+natural+food+and+nutritional+relation+ships+of+larval+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Rev.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Feeding behavior, natural food and nutritional relation ships of larval mosquitoes.</a> Annual Rev. Entomol. 37, 349-376 (1992).</li>
<li>Nasirian, H., Ladonni, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artificial+bloodfeeding+of+Anopheles+stephensi+on+a+membrane+apparatus+with+human+whole+blood%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Mosq+Control+Assoc%22%5BJournal%5D)">Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood.</a> J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).</li>
<li>Ng'habi, K. R., John, B., Nkwengulila, G., Knols, B. G., Killeen, G. F., Ferguson, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+larval+crowding+on+mating+competitiveness+of+Anopheles+gambiae+mosquitoes%5BTitle%5D)+AND+%22Malar+J%22%5BJournal%5D)">Effect of larval crowding on mating competitiveness of Anopheles gambiae mosquitoes.</a> Malar J. 30 (4), 49(2005).</li>
<li>Stobart, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+the+control+of+body+volume+in+the+larvae+of+the+mosquitoes+Aedes+aegypti+and+Aedes+detritus%5BTitle%5D)+AND+%22Edw.+J.+Exp.+Boil%22%5BJournal%5D)">Factors affecting the control of body volume in the larvae of the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes detritus.</a> Edw. J. Exp. Boil. 54, 67-82 (1971).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>מזון A</td><td></td><td>Aquaricare</td><td></td><td>מזון דגים טחון. יש להוסיף קמצוץ קטן.</td></tr><tr><td>מזון B</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>מזון חתולים טחון. יש להוסיף קמצוץ קטן.</td></tr><tr><td>מזון C</td><td></td><td>Purina</td><td></td><td>מזון חתולים. יש להוסיף שתי טבליות</td></tr><tr><td>RBC</td><td></td><td></td><td></td><td>תאי דם אדומים מוכנים: 40% hematocrit בסרום אנושי</td></tr><tr><td>RPMI</td><td>מצע</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CPD</td><td></td><td></td><td></td><td>נוגד קרישה</td></tr><tr><td>סרום</td><td></td><td></td><td></td><td>סרום אנושי מסוג O+</td></tr><tr><td>מזין יתושים</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>פרפילם</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anopheles gambiae</td><td></td><td></td><td></td><td>יתושים</td></tr><tr><td>10% sucrose</td><td></td><td></td><td></td><td>מזון ליתושים</td></tr><tr><td>מגודלת חרקים</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

פרוטוקול לגידול יתושים (א gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

פרוטוקול זה מתאר גידול יתושים insectary. החדרים insectary מתוחזקים על 28 ° C ו ~ לחות 80%, עם 12 שעות. יום / לילה מחזור. עבור הליך זה, תצטרך כלובים יתושים, 10% סוכרוז פתרון סטרילי, מגבות נייר, כוס נייר, whatman לסנן, ניזונים זכוכית, דם אדם ואמבטיה בסרום, מים, parafilm, מים מזוקקים, מגשי פלסטיק נקיים, מזון יתוש (כמתואר להלן), רשת יתושים על מנת לכסות את המגשים, ואקום, וחדר אוסף לאסוף מבוגרים.

וידאו זה מדגים את הטכניקות כללי המשמש האחורי אנופלס gambiae במעבדה. שיטות עבור הטיפול יתושים מעבדה הם הפגינו לאורך כל שלבי מחזור החיים של האורגניזם מ זחלים וגלמים אל על דם האכלה מבוגרים.

פרוטוקול זה מתאר גידול יתושים בבית החרקים. חדרי בית החרקים נשמרים בטמפרטורה של 28°C ובלחות של כ-80%, עם מחזור יום/לילה של 12 שעות...

שמי שיש ואני פוסט-דוקטור במעבדה של ד"ר George OU בבית הספר לבריאות הציבור של John Hopkins. במחלקה למיקרוביולוגיה מולקולרית ואימונולוגיה, אראה כיצד לגדל יתושים מהמין *Anopheles gambiae*. במעבדה, אנו מחזיקים אותם בחדר גידול חרקים, אשר מתוחזק בדרך כלל בטמפרטורה של 27 °C ובלחות של 80%.חדר גידול החרקים מתוחזק גם הוא במחזור של 12 שעות יום ולילה, כדי שנוכל לחקות את התנאים השוררים בטבע. זהו חדר גידול החרקים שברשותנו, המהווה מתקן מרכזי כאן לגידול החרקים הללו. כפי שניתן לראות, ישנן כאן מגשים שונים המכילים את הפיתומיות בשלבים שונים: הביצה, השלבים השונים של הזחלים והבופות.במגשים אלו ישנן זחלים, בני כ-11 או 12 ימים, וזוהי כלוב שבו אנו אוספים את היתושים הבוגרים ומחזיקים אותם בתמיסת סוכרוז 10%.ביום הראשון יש להאכיל את היתושים בדם, ומכאן הצורך בהאכלה בדם באמצעות ממברנה מלאכותית. זהו מאכיל זכוכית, המשמש להאכלת היתושים באמצעות ממברנה. אנו מחדירים את הדם פנימה דרך החור הקטן שרואים, והוא נשמר בתוכו.בתחתית הצד נמצאים שני פיתולי יציאה (nozzles), המחוברים לאמבט מים השומר על טמפרטורה של 37 °C. כדי לשמור על הדם חם ב-37 °C ולהכין את המזין להזנה, לוקחים פיסה קטנה של פריל (peril). מותחים אותה משני הקצוות ומכל ארבעת הצדדים, ואז מניחים אותה על הצד הפתוח של המזין הזכוכית כדי ליצור שכבה דקה של ממברנה, באופן המדמה את העור.זהו מה שנקרא הזנת ממברנה. זהו אמבט מים עם סירקולציה, השומר על טמפרטורת המים ב-37 °C ומזרים את המים דרך המזין הזכוכית, כך שהדם נשמר חם ב-37 °C. אנו מחברים את המזין הזכוכית באמצעות קפילריות קטנות ומחברים אותן לאמבט המים עם הסירקולציה, ומפעילים את אמבט המים כך שהמים יזרמו; המים והדם אינם מתערבבים לעולם מכיוון שהם נמצאים בשני תאים נפרדים.זהו כלוב של יתוש adulto מסוג Phis Gambi. זהו מאכיל הזכוכית, המחובר למסבב תרמי (circulating bath), אנו מניחים סגור בחלקו העליון של הכלוב ומוסיפים 200 µL של דם. הכלוב מכיל הן יתושים זכרים והן יתושים נקבות.רק הנקבה מגיעה להזנה בדם. ההזנה נמשכת כ-30 דקות. יומיים לאחר ההזנה בדם, הנחנו כוסות ביצים בתוך כלוב הפסולים עבור הגשת הביצים.כך מבצעים זאת. לוקחים כלי זכוכית קטן וממלאים אותו חלקית במים מזוקקים, לוקחים נייר ומספיגים אותו במים, לאחר מכן מקפלים אותו לצורת חרוט ומניחים אותו בתוך הכלי המכיל את המים המזוקקים, תוך וידוי שהנייר נרטב. כעת פותחים באיטיות את כלוב הפשיתיות, תוך הקפדה שלא לאפשר לאף פשית לצאת, ומניחים את כוסות הביצים בפנים.ביום למחרת להנחת הכוסות בתוך הכלוב, כלומר ביום הרביעי, הן מוצאות מהכלוב באיטיות. אלו הם הביצים, השחורות, שביניהן נמצאים גם מספר יתושים מתים. לאחר שהביצים מוכנות, מניחים אותן על מגש פלסטיק.ממלאים את מגש הפלסטיק במים מזוקקים. מוציאים את נייר המסנן עם הביצים ומניחים אותם בפנים. כמו כן, מוסיפים קורט של מזון, A, שהוא מזון דגים טחון, ומכניסים את המגש למדף.עלינו להשוות את התבנית ביום שבו אנו מתחילים את העבודה עם התבנית, וכן לציין אילו מינים נמצאים כאן. זהו השלב שלאחר הנחת הביצים בתבנית, כלומר למחרת. אלו בני יום אחד, אך הפרוטוקול הממשי הוא ביום החמישי למחזור חיי היתוש.אלו השחורים הם הביצים, שעומדות לבקוע לזחלים. ואלו הם המזונות עבור הפיתוייים. לגידול יתושים, אנו משתמשים בדרך כלל בשלושה סוגי מזונות שונים.מזון A הוא למעשה מזון דגים טחון, ואנו מוסיפים מזון זה כאשר אנו מתחילים את תרבית היתושים, בשלב X, כך שבכל יום אנו מוסיפים שתי טבליות של מזון C, שהוא מזון חתולים שנרכש מ-Purina. לאחר שמונה או תשעה ימים, אנו מחליפים את המים במגש ומספקים מים טריים. ובזמן זה, במקום מזון A, אנו מוסיפים קמצוץ של מזון B, שאינו אלא מזון C טחון, כלומר מזון חתולים טחון, וכן מוסיפים שתי טבליות של מזון C, הביצים הבוקעות לזחלים.קיימים שלושה שלבים שונים של הזחלים. הראשון בהתקנה, השני בהתקנה, והשלישי בהתקנה. אלו הן מגשים המכילים זחלים, אשר בני חמישה או שישה ימים.אלו הם ה-Ravi, הנמצאים בשלב מאוחר בהרבה, גיל של תשעה עד 10 ימים. במהלך הזמן פעם אחר פעם הוחלף המים והתווספו מים טריים ומזון טרי. מגש זה מכיל הן את הבוגרים והן את ה-ppe.אלו הם הבוגרים, כפי שניתן לראות, מעופפים תחת רשתות היתושים. ובקצה ניתן לראות את כל הפופות כהות הצבע, אשר יבקיעו לבוגרים. לאחר קבלת הבוגרים, הם מוכנים לאסוף לתוך כלוב, הנראה כך.בתוכו ישנה ריפוד של נייר סופג ובקבוק קטן המכיל 10% super solution וקופסת סבון מכותנה, אשר ישמשו כמקור מזון עבור היתושים. כיסينا את המכסה, וזהו המכשיר, השואב, המחובר לוואקום שדרכו נאסוף את הבוגרים מהמגשים הללו. חלק זה של השואב מחובר כאן ובקצה השני.מחובר לוואקום. נכניס את הכלוב, אליו נאסוף את הבוגרים לתוך הקופסה הקטנה הזו. זהו חלק נוסף מהשואב, הכולל צינור ארוך, שיוכנס לתוך מגש הפשישנקיות.הצד השני יחובר לכלוב. יש לוודא שהכל מהודק, כדי שהוואקום יעבוד כראוי. אנו סוגרים את המכסה ומוודאים שהכל אטום היטב.הפעילו לאט את מערכת האחורי (backend). ברגע שההגדרה מוכנה, נכניס לאט את הצינור הארוך הזה לתוך מגש היתושים, תוך כדי וידוא שאתם סוגרים את הרשת ושאינכם מאפשרים ליתושים לברוח. וכפי שניתן לראות, היתושים נאספים אל תוך הכלוב הקטן.העבירו את השואב לאורך כל השטח באיטיות כדי לאסוף את כל הפרטים הבוגרים. כעת כמעט סיימתי. כל הבוגרים נאספו, והם כולם נמצאים בכלוב הזה, כפי שניתן לראות.לאחר מכן, נשחרר באיטיות את הוואקום ונפרק את מכשיר האיסוף. אלה הם היתושים הבוגרים מסוג An. gambiae, שיהיו בכלוב זה למשך מספר ימים. הם יזינו תמיסת סוכרוז בריכוז 10%, ויינתן להם דם להזנה רק כאשר נרצה שהם יטילו ביצים.הראיתי לכם כעת כיצelijk לגדל Mosquitoes. בתנאי מעבדה, השלבים החשובים הם אספקת הדם, לאחר מכן הנחת כוסות הביצים, מעקב אחר הביצים, ולאחר מכן הם עוברים שלבים שונים כגון לרוות, pupae ומבוגרים.ולסיום, אנו אוספים את הבוגרים. חשיבותה של טכניקה זו היא שעלינו לחקות את התנאים הקיימים בחוץ, בתנאים טבעיים, כדי שנקבל יתושים בריאים, ולאחר מכן אנו מדביקים אותם ב-plasmodium ומבצעים סוגים שונים של מחקרים על המלריה, שמטרתם העיקרית היא למגר את המחלה מהעולם.

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

ברגע גן מזוהה עקשן פוטנציאלי עבור מלריה, זה חייב להיות מוערך על תפקידה במניעת זיהומים Plasmodium בתוך היתוש. פרוטוקול זה מדגים כיצד מידת זיהומים Plasmodium של יתושים יכול להיות assayed. טכניקות להכנת תרבות gametocyte, האכלה קרום יתושים דם האדם, assaying titers ויראלי midgut היתושים הם הפגינו.

פרוטוקול זיהומים Plasmodium falciparum בקביעת הפנוטיפ יתושים זיהום

גישות גנטיות הפוך הוכיחו שימושי ביותר לקביעת אילו גנים בבסיס התנגדות לפתוגנים וקטור יתושים. פרוטוקול זה ממחיש וידאו שיטה המשמשת את המעבדה Dimopoulos להזריק לתוך dsRNA אנופלס gambiae יתושים, אשר בנמל טפיל המלריה. הטכניקה מניפולציה ההתקנה הזרקה והזרקת dsRNA לתוך החזה מודגם.

פרוטוקול מבחני RNAi ב למבוגרים יתושים (א gambiae)

חוצה גנטי של טפילי מלריה מכרסם מבוצעות על ידי האכלה two טפילים שונים גנטית יתושים. הצאצאים רקומביננטי הם משובטים מהדם לאחר עכבר המאפשר יתושים לנשוך עכברים נגועים. סרט הווידאו הזה מראה איך לייצר צלבי הגנטי...

פרוטוקול עבור הפקה של הצלב גנטית של טפילי מלריה מכרסמים

ניתוחי RNA-Seq הופכים חשובים יותר ויותר לזיהוי היסודות המולקולריים של תכונות הסתגלות באורגניזמים שאינם מודלים. כאן, מתואר פרוטוקול לזיהוי גנים המתבטאים באופן דיפרנציאלי בין יתושי Aedes albopictus שאינם דיאפאוזה, מגידול יתושים, ועד לריצוף RNA וניתוחים ביואינפורמטיים של נתוני RNA-Seq.

ניסיוני וביואינפורמטיקה פרוטוקול לניתוח RNA-seq של Photoperiodic דיאפאוזה באסיה טייגר נגד יתושים, אדס המפוספס

באמצעות חיסון בחרוזים, הטכניקה המתוארת מאפשרת גירוי של תגובת המלניזציה של היתושים במערכת המחזור של המולימפה. ניתן למדוד את כמות המלנין המכסה את החרוזים לאחר דיסקציה כמדד לתגובה החיסונית.

ייחסתי<em&gt; Gambiae אנופלס</em&gt; יתושים עם חרוזים כדי לעודד ו למדוד את התגובה החיסונית melanization

Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia שוחררו לאוכלוסיות טבעי לדכא את השידור של arboviruses. אנו מתארים שיטות האחורי Ae. aegypti עם זיהומים Wolbachia במעבדה ניסויים ולשחרר שדה, נקיטת אמצעי זהירות כדי למזער את עיבוד מעבדה ובחירה.

שמירה על Aedes aegypti יתושים נגועים Wolbachia

פרוטוקול מוצג לניסוח של דיאטה מלאכותית ללא דם כדי להאכיל אנופלס יתושים בשבי. דיאטה זו יש ביצועים דומים דם בעלי חוליות ומפעיל oogenesis והתבגרות ביצה ומייצרת צאצאי מבוגרים קיימא.

דיאטה ללא דם ליתושים Anopheline אחוריים

מערכת GAL4-UAS הדו-צדדית היא כלי רב-תכליתי לשינוי ביטוי גנים באופן ספתיוטמפורלי מבוקר המאפשר ניתוח גנטי תפקודי בגמביה אנופלס. ההליכים המתוארים לשימוש במערכת זו הם אסטרטגיית שיבוט סטנדרטית למחצה, סקס וסינון של גלמים עבור סמני חלבון פלואורסצנטיים קיבעון עובר.

שימוש במערכת GAL4-UAS לגנטיקה תפקודית בגמביה אנופלס

הפרוטוקול מתאר כיצד להשיג שינויים מכווני אתר בגנום של יתושי מלריה אנופלס באמצעות מערכת φC31 . השינויים המתוארים כוללים הן את האינטגרציה והן את חילופי הקלטות מהונדסות בגנום של קווי עגינה נושאי attP.

אתר φC31-בתיווך אינטגרציה וחילופי קלטות בוקטורים אנופלס של מלריה

טכניקת החרקים הסטריליים (SIT) משמשת להדברת אוכלוסיות יתושים ספציפיות וחשובות מבחינה רפואית שעשויות להיות עמידות בפני הדברות כימיות. כאן אנו מתארים שיטה לגידול המוני והכנה של יתושים זכרים סטריליים לשחרור בתוכנית SIT מבצעית המכוונת ליתוש Aedes aegypti .

הכנת יתושי Aedes aegypti זכרים מוקרנים ומסומנים לשחרור בתוכנית טכניקת חרקים סטרילית מבצעית

טכניקות מיקרו-ג'ק-קציה חיוניות כדי להכניס גנים אקסוגניים לגנומים של יתושים. פרוטוקול זה מסביר שיטה המשמשת את מעבדת ג'יימס למיקרו-המצאת מבני DNA לעוברי אנופלס גמביה כדי ליצור יתושים שעברו טרנספורמציה.

שיטת מיקרו-ג'ק-קציה לעוברי אנופלס גמביה

למדו את שיטות הגידול של יתושי Anopheles gambiae במעבדה, כולל שליטה בטמפרטורה, לחות ומחזור אור. הפרוטוקול מדגים טיפוח בכל שלבי החיים לצורך מחקר מלריה ושליטה בנשאים.

פרוטוקול לגידול יתושים (א gambiae)

גלה סרטונים נוספים