טכניקת תיוג כפול של אימונופלואורסנציה כדי לדמיין חלבונים מארחים ופתוגנים בתא נגוע

התחל עם תאי אפיתל קבועים וחדירים הנגועים בטפיל פתוגני.

הוסף מאגר חוסם כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

שכבת נוגדנים ראשוניים רב-שבטיים של עכברים, במיוחד אינטראקציה עם חלבוני הטפיל.

הוסף נוגדנים משניים אדומים רחוקים המסומנים בפלואורופור המקיימים אינטראקציה עם נוגדנים ראשוניים הקשורים לחלבון טפיל.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים. חסום עם נוגדנים נגד עכברים הנקשרים לנוגדנים ראשוניים, וממזער את התגובתיות הצולבת במהלך תיוג חלבון מארח.

הוסף נוגדנים ראשוניים חד-שבטיים של עכבר המכוונים לריבונוקלאופרוטאינים מארחים בתוך תאי אפיתל.

שכבה עם תערובת של נוגדנים משניים ירוקים המסומנים על ידי פלואורופור ופאלואידין מצומד פלואורופור אדום, מה שמקל על תיוג הנוגדנים הראשוניים הקשורים לחלבון המארח ואקטין, בהתאמה.

שוטפים עם חיץ. הרכבה באמצעות מדיום המכיל כתם DNA, המקנה צבע כחול לגרעין המארח, גרעין הטפיל והקינטופלסט.

נתח את הדגימות באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי. טכניקת האימונופלואורסצנציה עם התווית הכפולה מציגה חלבונים מארחים ירוקים וחלבונים טפיליים אדומים, מה שמאפשר את הלוקליזציה התת-תאית המדויקת שלהם.

הוסף תאי LLC-MK2 בצלחות של 24 בארות המכילות כיסויים מעוגלים מעוקרים UV והניחו להם להתיישב למשך 16 שעות. לאחר מכן כדי להדביק את התאים, הוסיפו סופרנטנט המכיל T. cruzi לכל באר, ודגרו במשך שש שעות. לאחר מ