ניטור גלוטמט בזמן אמת של In Vivo באמצעות מערך מיקרואלקטרודות מצופה אנזים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 4:34 דק׳ • July 8th, 2025
נתחיל עם עכבר מורדם המאובטח על מסגרת סטריאוטקסית, כשהגולגולת חשופה.
זהה את נקודות הייחוס של הגולגולת ולאחר מכן סמן את קואורדינטות היעד.
קדחו סביב הסימן, הסירו את דש העצם כדי לחשוף את רקמת המוח ונקו את פני השטח.
חבר מערך רב-אלקטרודות או MEA מצופה באנזים גלוטמט אוקסידאז ומיקרופיפטה למסגרת הסטריאוטקסית.
מקם את אלקטרודת הייחוס הרחק מה-MEA תוך שמירה על מגע נוזלי עם המוח כדי להשלים את המעגל.
מלאו את המיקרופיפטה בתמיסת גלוטמט.
כעת, הורד את ה-MEA והמיקרופיפטה לרקמת המוח העשירה בנוירונים ואסטרוציטים. רשום את האות החשמלי הבסיסי מה-MEA.
הזריק את תמיסת הגלוטמט כדי להגדיל במהירות את רמות הגלוטמט בחלל החוץ-תאי המכיל את ה-MEA.
הגלוטמט אוקסידאז ב-MEA מחמצן את הגלוטמט ויוצר אות חשמלי.
כאשר אסטרוציטים סופגים גלוטמט, רמות הגלוטמט החוץ-תאיות יורדות, מפחיתות את האות ומאפשרות ניטור גלוטמט בזמן אמת.
בהליך זה, הנח את החיה במכשיר הסטריאוטקסי, והשתמש בסרגלי האוויר כדי לייצב את ראשה. ודא שהחיה מאובטחת והראש אינו זז. לאחר מכן, מרחו משחת עיניים באמצעות מוליך כותנה סטרילי. לאחר מכן, יש לגלח את הראש בעזרת גוזם, ולהסיר את הפרווה ליד האוזניים בעזרת מספריים כירורגיים קטנים. לאחר מכן, מרחו יוד ולאחר מכן אלכוהול על הקרקפת שלוש פעמים לסירוגין. לאחר מכן, בצע חתך באמצע הקרקפת, ופזר את העור.
ספגו כל דם עם קצה כותנה סטריל
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים