JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 1:30 דק' • March 4th, 2025
התחילו עם פרוסת מוח קורונלית קבועה מראש, מפורקת ומיובשת המכילה נוירונים שעוברים אפופטוזיס, המאופיינת במוות תאי ופיצול DNA.
כדי לזהות מוות תאי אפופטוטי באמצעות בדיקת TUNEL, טפל בפרוסת המוח עם האנזים פרוטאינאז-K.
פרוטאינאז-K נכנס לנוירונים ומנטרל DNases, ומונע פירוק DNA.
שטפו את הפרוסה כדי להסיר שאריות אנזימים.
הוסף מאגר המכיל צבע פלואורסצנטי המסומן deoxyuridine triphosphates, או dUTPs, ואת deoxynucleotidyl transferase טרמינלי, או אנזים TdT, ולאחר מכן לדגור.
בתאי עצב אפופטוטיים עם שפע של מקטעי דנ"א, האנזים TdT מצמיד את dUTPs הפלואורסצנטיים האלה לקבוצות 3′-הידרוקסיל החופשיות של מקטעי הדנ"א.
לעומת זאת, הדנ"א של תאי עצב בריאים נותר ללא תווית.
הכתימו את הרקמה עם DAPI, צבע גרעיני שנקשר לדנ"א בנוירונים בריאים ואפופטוטיים כאחד, ומכתים את גרעיניהם בכחול.
בהדמיה, נוירונים המכילים פלואורסצנטיות כחולה וירוקה מאשרים מוות של תאים אפופטוטיים ברקמת המוח.