JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 1:28 דק' • March 4th, 2025
איסוף חלקי מוח קבועים מעכברים נגועים בנגיף הכלבת התוך-מוחית במרווחי זמן מוגדרים לאחר המוות.
הנגיף מדביק נוירונים פירמידליים בקליפת המוח, ומבטא חלבונים נגיפיים הממוקמים בתוך מבנים גרגיריים תוך ציטופלזמיים המכונים גופי הכללה.
טפלו במקטעים עם אמוניום כלורי כדי לנטרל קבוצות תגובתיות המושרות על ידי קיבוע ולמזער כתמי רקע.
לטבול את החלקים מי חמצן כדי להשבית peroxidase אנדוגני ולהפחית אותות לא ספציפיים.
יש למרוח תמיסת חסימה המכילה חומר ניקוי כדי לחדור לקרומי התאים ולהסוות אתרי קישור לא ספציפיים.
דגירה עם נוגדנים ראשוניים ספציפיים לחלבונים הנגיפיים.
יש לשטוף ולדגור עם נוגדנים משניים מצומדים לביוטין הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
שטפו שוב והכניסו אבידין מצומד אנזים פרוקסידאז, שנקשר לביוטין, ואחריו סובסטרט כרומוגני שהאנזים ממיר למוצר צבעוני.
דמיינו את גופי ההכללה החיסונית המכילים חלבונים נגיפיים באמצעות מיקרוסקופ.
עם עלייה בזמן שלאחר המוות, השפלה עצבית והיעלמות של גופי הכללה מתבררים.